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汕头大学海洋科学接受调剂
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美琪琪

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量中阴性能跑出CQ为31的值,怎么回事啊,要疯了 ,跪求战友们帮助呀。 已有6人参与

跑荧光定量时,用灭菌水做的模板,跑了3次阴性对照,结果CQ值均为31点几;后面又用该引物跑其他病毒,没有扩增曲线,后面换了染料、灭菌水、重新稀释的引物、结果阴性还是跑出了扩增曲线,为什么会这样了?求解?荧光定量中阴性能跑出CQ为31的值,怎么回事啊,要疯了 ,跪求战友们帮助呀。
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JNVBNC

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

SYBR Green吗?跑Melt curve了吗?你的模板病毒是总RNA吗?从什么材料中提取的?
6楼2015-02-17 22:52:53
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
美琪琪(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-02-13 20:57:01
阴性对照有扩增是气溶胶污染吧。
你分开跑好难分辨,你要在跑其他病毒情况下,没有扩增曲线?那就说不通。
你设置一个实验,让其他病毒与你要做的病毒一起跑一次(程序一样吧?),设置多几个阴性对照,看看情况。
2楼2015-02-10 09:10:43
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
美琪琪(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-02-13 20:57:10
气溶胶真的很难对付,可以在A实验室稀释模板,在B实验室配制体系、加样,在C实验室上机,实验结束后使用紫外照射30min-2h是有好处的。
有你真好
3楼2015-02-11 11:06:28
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冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-02-13 20:57:23
应该不是试剂污染造成的  是超净工作台上的气溶胶污染!我遇到这样情况是这样解决的:1.SYBR GREEN的试剂专门放在一个盒子里,每次使用都戴手套 和引物分开放。2.使用超净工作台前 都会使用酒精和大量水喷洗工作台,并且使用干净的一次性棉布搽干净。自然晾干 3.配置体系在一个房间,加样在一个房间 反正会导致交叉污染的地方都分开操作 最后跑完的QPCR产物有多远扔多远 反正不要和你操作的房间在一起  我一般直接扔在比较远的试剂垃圾桶。祝好运(手打 不容易 )
生命不息奋斗不止
4楼2015-02-12 19:25:55
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