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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量中阴性能跑出CQ为31的值，怎么回事啊，要疯了 ，跪求战友们帮助呀。
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美琪琪

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量中阴性能跑出CQ为31的值，怎么回事啊，要疯了 ，跪求战友们帮助呀。 已有6人参与

跑荧光定量时，用灭菌水做的模板，跑了3次阴性对照，结果CQ值均为31点几；后面又用该引物跑其他病毒，没有扩增曲线，后面换了染料、灭菌水、重新稀释的引物、结果阴性还是跑出了扩增曲线，为什么会这样了？求解？荧光定量中阴性能跑出CQ为31的值，怎么回事啊，要疯了 ，跪求战友们帮助呀。
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1楼 2015-02-09 18:37:12
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
美琪琪(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-02-13 20:57:01
阴性对照有扩增是气溶胶污染吧。
你分开跑好难分辨，你要在跑其他病毒情况下，没有扩增曲线?那就说不通。
你设置一个实验，让其他病毒与你要做的病毒一起跑一次（程序一样吧？），设置多几个阴性对照，看看情况。
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2楼2015-02-10 09:10:43
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
美琪琪(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-02-13 20:57:10
气溶胶真的很难对付，可以在A实验室稀释模板，在B实验室配制体系、加样，在C实验室上机，实验结束后使用紫外照射30min-2h是有好处的。
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有你真好
3楼2015-02-11 11:06:28
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冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-02-13 20:57:23
应该不是试剂污染造成的  是超净工作台上的气溶胶污染！我遇到这样情况是这样解决的：1.SYBR GREEN的试剂专门放在一个盒子里，每次使用都戴手套 和引物分开放。2.使用超净工作台前 都会使用酒精和大量水喷洗工作台，并且使用干净的一次性棉布搽干净。自然晾干 3.配置体系在一个房间，加样在一个房间 反正会导致交叉污染的地方都分开操作 最后跑完的QPCR产物有多远扔多远 反正不要和你操作的房间在一起  我一般直接扔在比较远的试剂垃圾桶。祝好运（手打 不容易 ）
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生命不息奋斗不止
4楼2015-02-12 19:25:55
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doglet

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
美琪琪(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-02-13 20:57:35
实验室污染了，换个房间你做，或者用去DNA的试剂擦拭台面，抢，换TIP等，应该可以了
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5楼2015-02-13 14:31:57
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JNVBNC

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

SYBR Green吗？跑Melt curve了吗？你的模板病毒是总RNA吗？从什么材料中提取的？
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6楼2015-02-17 22:52:53
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美琪琪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bbqlhb at 2015-02-10 09:10:43
阴性对照有扩增是气溶胶污染吧。
你分开跑好难分辨，你要在跑其他病毒情况下，没有扩增曲线?那就说不通。
你设置一个实验，让其他病毒与你要做的病毒一起跑一次（程序一样吧？），设置多几个阴性对照，看看情况。

首先抱歉啊，年前一直忙于写文章所以好久没逛这个论坛了，是这样的我年前用其他病毒和水做的阴性对照，但其他病毒没有跑出扩增曲线，但是用水作的阴性且有，但是年后我又重新跑了一次，结果用年前跑阴性对照的病毒也跑出了CQ值，当然了水作的阴性也有。怎么个情况了。谢谢了
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7楼2015-03-06 23:43:34
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美琪琪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by a314919473 at 2015-02-11 11:06:28
气溶胶真的很难对付，可以在A实验室稀释模板，在B实验室配制体系、加样，在C实验室上机，实验结束后使用紫外照射30min-2h是有好处的。

关于气溶胶我也考虑到了，但是我每次用水作的阴性对照CQ值为31点几，我可不可以就把这个值作为一个阴性的临界点了？我总共跑了10次用水作的对照，几乎和这个值相近。
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8楼2015-03-06 23:47:16
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美琪琪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by JNVBNC at 2015-02-17 22:52:53
SYBR Green吗？跑Melt curve了吗？你的模板病毒是总RNA吗？从什么材料中提取的？

是这个染料，跑了的，我的模板是病毒中的一个基因而已，从尿囊液中提取的病毒，然后做的标准质粒。
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9楼2015-03-06 23:57:40
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小佳佳佳佳

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你好，请问下这个问题你是怎么解决的。向您请教下。
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10楼2016-03-02 10:35:20
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