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求助大家Elisa实验问题~ 已有3人参与
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我在进行Elisa实验的初步摸索阶段，以前从来没有接触过相关实验，也没有很系统的学习过 希望各位大神们能帮帮忙！先谢过~~~ 前言：1.我使用的是双抗夹心法，由于没有两个不同位点的单抗，故选择的是一个单抗一个多抗； 2.同时没有自己制作酶标抗体，而是采用 抗体（兔源）-抗原-抗体（鼠源）-酶标羊抗鼠 来检测； 3.检测过程中，先用已知浓度的标准纯抗原来制作曲线，用Logistic曲线拟合2（四参数）算法拟合曲线，R方都在0.999以上，我认识的一个之前做过抗体的人说结果很好（我不太懂）； 4.抗原为细菌中表达的蛋白，需要检测的是转到植物中表达的该抗原； 现遇到的问题如下： 1. 我用纯抗原来做曲线是一个Logistic曲线拟合2（四参数）的曲线，不是直线，需要用ElisaCalc这个软件来计算，这样的结果对么？ 2. 用纯抗原做好曲线后，检测植物蛋白检测不出来（已用商品化试剂盒测试确定提取物中含有转入的蛋白）检测抗原蛋白却能检测出来（平行操作）是为什么呢？正反包被都测试过（即包被多抗+抗原+单抗+抗单抗酶标二抗；包被单抗+抗原+多抗+抗多抗酶标二抗），抗原可以检测出来，含抗原的植物提取物却检不出来；直接包被植物提取物+单抗/多抗+相应酶标二抗检测，结果很怪异，阴阳性全部一样深。。。（整个人都不好了。。。） PS：木有条件购买其他抗体，只有一个多抗和一个单抗，单独验证过单抗、多抗均可以与抗原反应 请教大神们这个怎么解~小女子真的想不出来了~跪谢！！！  |
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【答案】应助回帖
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sandydcy: 金币+5, ★有帮助 2015-01-29 09:14:08
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sandydcy: 金币+5, ★有帮助 2015-01-29 09:14:08
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我觉得很有可能植物提取物中的蛋白的抗体识别位点被修饰了，导致抗体无法识别抗原，如已酰化，磷酸化等。有个疑问，您的植物提取物中的蛋白是变性的还是天然形式的！ 同时推荐你个北京启维益成科技有限公司的学习贴http://www.bioconsumable.com/cn/tech/2011/12-23/tech_22884582.htm |
7楼2015-01-28 11:14:25
kzwing
新虫 (初入文坛)
- 应助: 1 (幼儿园)
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- 专业: 细胞生物学研究中的新方法
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