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四月雨滴

银虫 (小有名气)

[交流] 苯酚氯仿抽提 已有2人参与

有苯酚氯仿异戊醇抽提DNA,有机相是上层,是怎么回事????
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781055707

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-01-26 20:13:05
酚能使蛋白质变性,同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。
氯仿:克服酚的缺点;加速有机相与液相分层。
最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚。(酚易溶于氯仿中)
异戊醇:减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡产生。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
采菊东篱下,悠然见南山。
2楼2015-01-26 09:21:53
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四月雨滴

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2015-01-26 09:21:53
酚能使蛋白质变性,同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。
氯仿:克服酚的缺点;加速有机 ...

可是我的有机相在上层,这是怎么回事啊?
3楼2015-01-26 15:10:33
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781055707

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 四月雨滴 at 2015-01-26 15:10:33
可是我的有机相在上层,这是怎么回事啊?...

换高速离心下,看看。
采菊东篱下,悠然见南山。
4楼2015-01-26 15:15:21
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zhuobaowen

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
先用酚氯仿抽提,吸取上清,再加醇使DNA析出

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2015-01-27 08:52:46
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四月雨滴

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 781055707 at 2015-01-26 15:15:21
换高速离心下,看看。...

12000转,离心的,还要更高吗?
6楼2015-01-27 11:00:06
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