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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 苯酚氯仿抽提
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四月雨滴

银虫 (小有名气)

[交流] 苯酚氯仿抽提 已有2人参与

有苯酚氯仿异戊醇抽提DNA，有机相是上层，是怎么回事？？？？
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1楼 2015-01-26 09:08:32
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781055707

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-01-26 20:13:05
酚能使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。
氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。
最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。（酚易溶于氯仿中）
异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
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采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2015-01-26 09:21:53
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四月雨滴

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2015-01-26 09:21:53
酚能使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。
氯仿：克服酚的缺点；加速有机 ...

可是我的有机相在上层，这是怎么回事啊？
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3楼2015-01-26 15:10:33
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781055707

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 四月雨滴 at 2015-01-26 15:10:33
可是我的有机相在上层，这是怎么回事啊？...

换高速离心下，看看。
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采菊东篱下，悠然见南山。
4楼2015-01-26 15:15:21
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zhuobaowen

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
先用酚氯仿抽提，吸取上清，再加醇使DNA析出

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2015-01-27 08:52:46
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四月雨滴

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 781055707 at 2015-01-26 15:15:21
换高速离心下，看看。...

12000转，离心的，还要更高吗？
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6楼2015-01-27 11:00:06
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