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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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落木778

铜虫 (小有名气)

[求助] 构建携带HA标签的基因 已有2人参与

各位，请求帮助，我需要在基因的3'端构建携带HA标签，需要将终止密码子从目的基因序列后面转移到融合标签基因序列后面。
这样做的方法是什么? 谢谢！！！
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1楼 2015-01-23 17:08:38
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落木778

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2015-01-25 09:40:16
我最多在引物的5‘端另外加了20多个碱基，引物本身长20多，最后引物就有近50bp，是能P出来的，HA标签30多的话，可以试一试。另外Tm值的计算不是完全看引物长度的，要看与模板的配对程度。...

谢谢！
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7楼2015-01-25 15:33:15
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
落木778(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-23 21:50:25
一般如果是HA标签在3‘端的质粒的话，它后面会自带终止密码子的不用另外加，在扩增自己基因的是候引物不带终止密码子就可以了，另外注意不要移码。
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2楼2015-01-23 18:21:31
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落木778

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2015-01-23 18:21:31
一般如果是HA标签在3‘端的质粒的话，它后面会自带终止密码子的不用另外加，在扩增自己基因的是候引物不带终止密码子就可以了，另外注意不要移码。

我打算设计携带HA-tag的引物，然后直接PCR扩增出目的基因-HA片段，这样的话就涉及终止密码子的问题了。谢谢！！！
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3楼2015-01-23 21:26:02
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
选好起始和终止，两外你的验证ha的表达
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落木778
4楼2015-01-23 21:31:05
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