版块导航: 正在加载中...

登录注册

应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告

返回列表

574759350

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 183
帖子: 100
在线: 22.4小时
虫号: 646680
注册: 2008-11-05
专业: 微生物资源与分类学

[求助] 枯草芽孢杆菌感受态制备方法已有1人参与

大家有没有枯草芽孢杆菌感受态的制备方法啊，急求，谢谢！

回复此楼

» 猜你喜欢

留学--博士招生已经有16人回复
化学工程，本211，求调剂，ab区不限已经有4人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有267人回复
湖北师范大学招调剂啦已经有7人回复
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂已经有0人回复
天津商业大学生物与医药课题组招生已经有0人回复
生物化工学硕招收调剂已经有0人回复
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生已经有0人回复
317分一志愿江南大学化学工程学硕求调剂已经有6人回复
化工申博已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

1楼 2015-01-19 14:25:51

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

lyl4840361

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 3.3
帖子: 15
在线: 10小时
虫号: 3321313
注册: 2014-07-13
性别: GG

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
574759350(西门吹雪170代发): 金币+5, 鼓励热心回帖交流 2015-03-10 22:39:06

一、感受态制备
新鲜平板挑单菌落（小一点为好）接种于3ml LB液体培养基中，过夜培养12h；
2）取过夜培养物接入50ml LB+0.5M 山梨醇，37℃，200rpm培养至对数生长期OD600=0.85~0.95（控制好接种量，使接种完毕后培养基的OD≈0.2，大约3-4h）；枯草芽孢杆菌T0期（对数生长期末期到稳定期）形成感受态，
3）取全部菌液冰浴10 min，然后5000rpm，6min，4℃离心收集菌体；
4）用30ml预冷的电转培养基（0.5M山梨醇，0.5M甘露醇，10%甘油）重新吹悬菌体，5000rpm，8min，4℃离心去上清，如此漂洗4次；
5）将洗涤后的菌体吹悬于0.5 ml电转培养基中，分装60μl/ 管,直接电转化，或者于-80℃保藏。
制备感受态细胞注事项：
1. 每次制备感受态细胞的致敏缓冲液都应该新鲜配制；
2.感受太细胞在－80℃储存5－6周后，其转化率会降低，可以用已知标准闭环质粒来鉴定感受态细胞的转化能力；
3.制备感受态用的器皿（三角瓶，离心杯，电转化杯）都要洗刷干净，不要有任何去污剂和离子的残留；
4.整个过程要低温；
5.摇菌的OD值不要超过1；
6.在10% 甘油+0.5山梨醇+0.5甘露醇的基础上再加入0.5M海藻糖，可提高转化率。
7.平板抗性可适度降低；
8.复苏时提高溶氧将低转速。
二、电转化
1）将60μl感受态细胞中加入50ng质粒DNA（1~8μl），冰上孵育5min，加入预冷的电转杯（1mm）中，电击一次。
(感受态细胞从-80冰箱拿出来后在冰上融化，DNA样品加入感受态也要在冰上完成，并且混合后立刻擦干电转)
电转仪设置：2.0kv（25μF 200Ω 1mm ）电击1次（时间常数=4.5~5.0ms,如果时间常数<4.2 ,则需要增加电转培养基的漂洗次数或者提高感受态的稀释倍数来获得更高的转化效率）
2）电击完毕取出杯子并立即加入（在酒精灯旁即可）1ml RM动作要轻柔（LB+0.5M山梨醇+0.38甘露醇），37℃，120rpm，复苏3h;
3）5000 rpm离心,5分钟,弃上清剩100ul，涂板 37℃，过夜培养。

赞一下(1人)