| 查看: 2390 | 回复: 4 | ||
[求助]
枯草WB800电转 已有1人参与
|
| 请教各位，看了不少电转方案，奇怪的是洗涤/电转液有的用的是0.5M山梨醇+0.5M甘露醇+10%甘油，有的却是把10%甘油换成了10%葡萄糖，请问这个和10%甘油哪个更好呢？文献里看的都是加甘油。拜谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有101人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于枯草芽孢杆菌转化的问题~
已经有7人回复
- 制作超级电转感受态注意事项
已经有8人回复
- 质粒的电转和热激法原理和利弊
已经有3人回复
- 枯草芽孢杆菌发酵起泡严重，求高人指点
已经有27人回复
- 关于纳豆芽孢杆菌的英文名称
已经有5人回复
- 枯草芽胞杆菌长成这样是怎么了？干燥了吗？附照片。
已经有11人回复
- 急求酿酒酵母的电转感受态制备方法和转化方法
已经有13人回复
- 【求助/交流】线性化质粒转化枯草方法
已经有7人回复
- 【求助/交流】电转杯问题
已经有23人回复
yipan 
铜虫 (职业作家)
- MolEPI: 1
- 应助: 214 (大学生)
- 金币: 17411.4
- 散金: 275
- 红花: 6
- 帖子: 4327
- 在线: 195.9小时
- 虫号: 2743878
- 注册: 2013-10-22
- 性别: GG
- 专业: 整合生物学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-03-17 10:25:12
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-03-17 10:25:12
|
枯草芽孢杆菌电转方案（高渗透法） 转化 1）接种B . subtilis于3mlLB培养基中，过夜培养.。 2）取2.6ml过夜培养物接入40ml（LB+0.5M 山梨醇）中，37℃，200rpm培养至OD600=0.85~0.95. 3）将菌液冰水浴10 min，然后5000g，5 min，4℃离心收集菌体。 4）用50ml预冷的电转培养基（0.5M山梨醇，0.5M甘露醇，10%葡萄糖），重新吹悬菌体，5000g，5min，4℃离心去上清，如此漂洗4次。 5）将洗涤后的菌体吹悬于1ml电转培养基中，每EP管分装120。 6）将60μl感受态细胞中加入50ngDNA（1~8μl），冰上孵育2min，加入预冷的电转杯（1mm）中，电击一次。电转仪设置：2.0kv,1mm,电击1次。（电击结果：时间常数=4.5~5.0ms,如果时间常数<4.2 ,则需要增加电转培养基的漂洗次数或者提高感受态的稀释倍数来获得更高的转化效率） 7）电击完毕取出杯子并立即加入1ml RM（LB+0.5M山梨醇+0.38甘露醇），37℃，200rpm，复苏3h后，涂板。37℃，过夜培养。 准备 40ml（LB+0.5M山梨醇）：蛋白胨10g/l , 酵母粉5g/l , NaCl 10g/l , 3.6g山梨醇pH=7.2 200ml电转培养基（0.5M山梨醇，0.5M甘露醇，10%葡萄糖）：18g 山梨醇，18.5g甘露醇，20g葡萄糖。 10ml RM（0.5M山梨醇，0.38M甘露醇）：0.9g山梨醇，0.7g甘露醇。 2个50ml离心管，灭菌。 |
2楼2014-03-17 09:46:21
3楼2014-03-17 15:10:35
yipan
铜虫 (职业作家)
- MolEPI: 1
- 应助: 214 (大学生)
- 金币: 17411.4
- 散金: 275
- 红花: 6
- 帖子: 4327
- 在线: 195.9小时
- 虫号: 2743878
- 注册: 2013-10-22
- 性别: GG
- 专业: 整合生物学
【答案】应助回帖
★ ★
xissy: 金币+2, 和我所需要的相差甚远，但还是谢谢吧~ 2014-03-17 16:42:05
xissy: 金币+2, 和我所需要的相差甚远，但还是谢谢吧~ 2014-03-17 16:42:05
|
其实是根据实验方法的不同，用的试剂 培养基不同。没有什么优劣。 第一种方法：电转化 实验试剂： GM:LB+0.5M 山梨醇 ETM:0.5M山梨醇，0.5M甘露醇，10%甘油 RM：LB+0.5M山梨醇+0.38甘露醇 电转仪：eppendorf 第二种方法：Spizizen转化 Spizizen基本培养基：10×Spizzen基本盐培养基100ml/L，50%(w/v)葡萄糖10ml/L，色氨酸母液（5mg/ml）10ml/L，琼脂1.5%（w/v）。0.06Mpa压力下灭菌20min。 第三种方法：原生质体法(Takashi) CM培养基 葡萄糖1％，蛋白胨1％，酵母抽提物2％，牛肉膏0.5％，NaCl 0.5％，pH7.2，115℃灭菌15min 2*SMM培养基 蔗糖342.4g（1M），顺丁烯二酸4.46g（0.04M），MgCl2•6H2O 8.12g（0.04M）加去离子水定容至1000mL，pH7.5，115℃灭菌15min HCP-1.5培养基 250ml琥珀酸钠（2M PH7.3），酪蛋白水解物5g，酵母抽提物5g, MgCl2•6H2O 1.9g,葡萄糖 5g， K2HPO4 3.5g , KH2PO4 1.5g, 聚乙烯吡咯烷酮15g ,115℃灭菌15min 再生培养基：HCP-1.5培养基加2%琼脂 半固体HCP-1.5培养基：HCP-1.5培养基加0.8%琼脂 溶菌酶（一般用途）用水配制成50mg/mL溶菌酶溶液，分装成小份，保存于-20℃。 第四种方法：原生质体转化之二 2*SMM培养基： 蔗糖172.2g（0.5M），顺丁烯二酸2.23g（0.02M），MgCl2•6H2O 4.06g（0.02M）加去离子水定容至1000mL，pH7.0，115℃灭菌15min SMMP培养基： 蔗糖172.2g（0.5M），顺丁烯二酸2.23g（0.02M），MgCl2•6H2O 4.06g（0.02M），葡萄糖1％，蛋白胨1％，酵母抽提物1％，牛肉膏0.5％，NaCl 0.5％，K2HPO40.5%加去离子水定容至1000mL，pH7.0，115℃灭菌15min CMR完全再生培养基： 蔗糖172.2g（0.5M），顺丁烯二酸2.23g（0.02M），MgCl2•6H2O 4.06g（0.02M），葡萄糖1％，蛋白胨1％，酵母抽提物1％，牛肉膏0.5％，NaCl 0.5％，K2HPO40.5%，调pH7.2～7.5，而后加入1.5％的琼脂粉，115℃灭菌15min. 溶菌酶（一般用途）用水配制成50mg/mL溶菌酶溶液，分装成小份，保存于-20℃。 溶菌酶(原生质体转化)普通溶菌酶0.22μm过滤灭菌后，用SMMP调制成1mg/mL的终浓度。 |
4楼2014-03-17 15:25:18
5楼2015-01-30 17:23:04
