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xinlvputao

新虫 (初入文坛)

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帖子: 11
在线: 5.9小时
虫号: 2404947
注册: 2013-04-04
专业: 生物化学

[交流] 如何确保DNA探针充分形成发夹结构已有2人参与

设计了发夹形DNA探针，由life technology合成，纯度PAGE级，之前是按照100度变性10分钟，然后置于室温25度，复性30min以上。但后续应用效果不好。问题如下：1）如何表征发夹结构形成没有？以及形成的比例？2）看到虫友说确保缓慢降温即可，那如何在PCR仪上实现缓慢降温？3）也有的说缓慢降温至退火温度，那如何确定发夹探针的退火温度？为什么杂交反应退火要求较Tm值低20-25度，而PCR反应要求退火温度较Tm值低5度？亟待各位大侠回复，万分感谢！

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