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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » DNA链怎么形成发夹结构
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jx917

银虫 (初入文坛)

[求助] DNA链怎么形成发夹结构 已有3人参与

求助DNA链怎么形成发夹结构呢？具体操作步骤是怎么样的？有没有文献可以参考一下？希望各位大神帮帮我啊，不甚感激
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1楼 2014-05-06 21:41:57
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greatnerve

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-05-08 12:15:13
jx917: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-05-12 09:45:44
90°C水浴退火10min，然后自然冷却至室温。可以用含Mg的缓冲溶液。跟双链杂交差不多
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2楼2014-05-08 09:33:58
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jx917

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by greatnerve at 2014-05-08 09:33:58
90°C水浴退火10min，然后自然冷却至室温。可以用含Mg的缓冲溶液。跟双链杂交差不多

我是95℃加热5min，缓慢冷却至室温，用的是TE缓冲液，不含Mg离子，怎么也不能成功，不知道是怎么回事。我看见也有不用含Mg的缓冲溶液做的
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3楼2014-05-08 20:17:03
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greatnerve

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jx917 at 2014-05-08 20:17:03
我是95℃加热5min，缓慢冷却至室温，用的是TE缓冲液，不含Mg离子，怎么也不能成功，不知道是怎么回事。我看见也有不用含Mg的缓冲溶液做的...

照理是可以形成发夹的、、、我正在进行的实验含2个发夹结构，有时候现象会不好，我也会怀疑是发夹杂交的不好、、、你是如何确定没有成功？
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4楼2014-05-09 10:26:38
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jx917

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by greatnerve at 2014-05-09 10:26:38
照理是可以形成发夹的、、、我正在进行的实验含2个发夹结构，有时候现象会不好，我也会怀疑是发夹杂交的不好、、、你是如何确定没有成功？...

我也觉得理论上可以形成，可是现象不好。我把处理和没处理的都测了荧光，强度基本一样
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5楼2014-05-09 18:51:55
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jx917

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by greatnerve at 2014-05-09 10:26:38
照理是可以形成发夹的、、、我正在进行的实验含2个发夹结构，有时候现象会不好，我也会怀疑是发夹杂交的不好、、、你是如何确定没有成功？...

用含Mg的缓冲液是不是更容易成功些？
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6楼2014-05-09 18:53:02
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ycy098021

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-07-03 12:28:17
jx917: 金币+1, ★有帮助 2014-07-11 16:56:59
引用回帖:
4楼: Originally posted by greatnerve at 2014-05-09 10:26:38
照理是可以形成发夹的、、、我正在进行的实验含2个发夹结构，有时候现象会不好，我也会怀疑是发夹杂交的不好、、、你是如何确定没有成功？...

想请教一下两个发夹结构，一个环上的碱基与另一个茎部加环上部分碱基互补能不能互相打开？
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有多大的思想，才有多大的能量
7楼2014-07-03 11:07:44
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weiwei311

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以设计序列如：AATGA GCGCGCGCGC -ATTACTAG-GCGCGCGCGC -退火温度根据GC含量来确定，然后设置两个实验组加Mg离子和不加Mg离子！检验有没有形成发夹结构：用分子杂交方法。设计富含GC的荧光探针，杂交、洗脱、检测
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越努力，越幸运！！！
8楼2015-01-08 16:03:31
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luo569167836

新虫 (初入文坛)
我现在也遇到了同样的问题，热处理加含Mg离子的缓冲也没有用，跟没处理时一样，不知道你解没解决这个问题，求指导，非常感谢
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9楼2016-05-03 21:38:04
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南工邓

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by luo569167836 at 2016-05-03 21:38:04
我现在也遇到了同样的问题，热处理加含Mg离子的缓冲也没有用，跟没处理时一样，不知道你解没解决这个问题，求指导，非常感谢

请问您解决了吗？
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哈哈哈，人生且歌且酒且狂乐！
10楼2019-07-20 15:44:07
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