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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于DNA碱基配对反应的条件
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1056336909

银虫 (小有名气)

[求助] 关于DNA碱基配对反应的条件 已有2人参与

有没有哪位大神知道单链DNA通过碱基配对反应形成双链的实验条件，比如温度、时间、缓冲液等，最好提供一些资料，感激不尽。PS：最好再提供一下双链DNA解链时的实验条件，thanks again.
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知识改变命运
1楼 2013-12-13 10:55:35
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这个反应是得通过PCR，而PCR的延伸等温度，以及反应体系，你可以通过各种渠道查询
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我不会！
2楼2013-12-13 11:08:37
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1056336909

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 三蛰 at 2013-12-13 11:08:37
你这个反应是得通过PCR，而PCR的延伸等温度，以及反应体系，你可以通过各种渠道查询

不是学生物的，不太了解，能不能具体介绍一下。
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知识改变命运
3楼2013-12-13 11:13:14
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1056336909: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-12-13 12:49:54
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-13 14:54:47
如果你要让两条单链DNA配对成为双链DNA，这不涉及化学反应，也不涉及PCR的问题。按摩尔比1:1混好了，95度加热十分钟，然后缓慢降温到室温即可，缓冲液随意，条件别太极端就行。
相应的，如果你要让双链DNA解链，95度加热十分钟就行，但是温度一旦降低，就会又回去了。
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4楼2013-12-13 11:59:51
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1056336909

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lihe131 at 2013-12-13 11:59:51
如果你要让两条单链DNA配对成为双链DNA，这不涉及化学反应，也不涉及PCR的问题。按摩尔比1:1混好了，95度加热十分钟，然后缓慢降温到室温即可，缓冲液随意，条件别太极端就行。
相应的，如果你要让双链DNA解链，95 ...

如果我已经有单链DNA，在室温下是不是也可以反应得到双链DNA？另外，单链DNA是不是存在自身缠绕、配对等问题？
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知识改变命运
5楼2013-12-13 12:49:14
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)
★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+5, 鼓励交流！ 2013-12-13 14:55:44
引用回帖:
5楼: Originally posted by 1056336909 at 2013-12-13 12:49:14
如果我已经有单链DNA，在室温下是不是也可以反应得到双链DNA？另外，单链DNA是不是存在自身缠绕、配对等问题？...

单链DNA是否自身配对，取决于其碱基序列和长度。如果单链DNA序列里有互补的区间，并且长度也可以容忍其自身配对所产生的张力，就会发生自配对。比如举个粗糙的例子，AAGGCCTTNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNAAGGCCTT，两端可能就会发生配对。

之所以要先加热到95度，就是希望单链DNA自身的氢键，离子键等等全部被打破，继而在缓慢降温的情况下，与另一单链DNA形成双链DNA，降温过程一定要缓慢，严禁冷激，否则会发生非特异性的配对。所以通常用单链DNA制备双链DNA时，保险起见，加热到95度这个过程是不省略的，至少我看到的文献都是如此，而且这个过程也并不繁琐，有个加热块就行了，没必要省略。
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6楼2013-12-13 13:09:10
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