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1056336909

银虫 (小有名气)

[求助] 关于DNA碱基配对反应的条件已有2人参与

有没有哪位大神知道单链DNA通过碱基配对反应形成双链的实验条件,比如温度、时间、缓冲液等,最好提供一些资料,感激不尽。PS:最好再提供一下双链DNA解链时的实验条件,thanks again.
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知识改变命运
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你这个反应是得通过PCR,而PCR的延伸等温度,以及反应体系,你可以通过各种渠道查询
我不会!
2楼2013-12-13 11:08:37
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1056336909

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 三蛰 at 2013-12-13 11:08:37
你这个反应是得通过PCR,而PCR的延伸等温度,以及反应体系,你可以通过各种渠道查询

不是学生物的,不太了解,能不能具体介绍一下。
知识改变命运
3楼2013-12-13 11:13:14
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1056336909: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-12-13 12:49:54
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-13 14:54:47
如果你要让两条单链DNA配对成为双链DNA,这不涉及化学反应,也不涉及PCR的问题。按摩尔比1:1混好了,95度加热十分钟,然后缓慢降温到室温即可,缓冲液随意,条件别太极端就行。
相应的,如果你要让双链DNA解链,95度加热十分钟就行,但是温度一旦降低,就会又回去了。
4楼2013-12-13 11:59:51
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1056336909

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lihe131 at 2013-12-13 11:59:51
如果你要让两条单链DNA配对成为双链DNA,这不涉及化学反应,也不涉及PCR的问题。按摩尔比1:1混好了,95度加热十分钟,然后缓慢降温到室温即可,缓冲液随意,条件别太极端就行。
相应的,如果你要让双链DNA解链,95 ...

如果我已经有单链DNA,在室温下是不是也可以反应得到双链DNA?另外,单链DNA是不是存在自身缠绕、配对等问题?
知识改变命运
5楼2013-12-13 12:49:14
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+5, 鼓励交流! 2013-12-13 14:55:44
引用回帖:
5楼: Originally posted by 1056336909 at 2013-12-13 12:49:14
如果我已经有单链DNA,在室温下是不是也可以反应得到双链DNA?另外,单链DNA是不是存在自身缠绕、配对等问题?...

单链DNA是否自身配对,取决于其碱基序列和长度。如果单链DNA序列里有互补的区间,并且长度也可以容忍其自身配对所产生的张力,就会发生自配对。比如举个粗糙的例子,AAGGCCTTNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNAAGGCCTT,两端可能就会发生配对。

之所以要先加热到95度,就是希望单链DNA自身的氢键,离子键等等全部被打破,继而在缓慢降温的情况下,与另一单链DNA形成双链DNA,降温过程一定要缓慢,严禁冷激,否则会发生非特异性的配对。所以通常用单链DNA制备双链DNA时,保险起见,加热到95度这个过程是不省略的,至少我看到的文献都是如此,而且这个过程也并不繁琐,有个加热块就行了,没必要省略。
6楼2013-12-13 13:09:10
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