应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 微米和纳米 » 性能应用 » 关于羧基聚苯乙烯微球偶联抗体后的稳定性问题
151/2返回列表12下一页
查看: 5360  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

王雨云

金虫 (小有名气)

[求助] 关于羧基聚苯乙烯微球偶联抗体后的稳定性问题 已有1人参与

0.2um的羧基聚苯乙烯微球，通过EDC活化后偶联一个抗体，微球抗体复合物4度保存稳定性差。主要是4度保存后荧光信号会明显高于刚稀释好的微球的荧光信号，分析原因是聚苯乙烯微球的疏水作用，静电作用等可能导致微球包被抗体后发生部分凝集（肉眼不可见的凝集），通过优化标记抗体的浓度，缓冲液pH，EDC用量等均未能改变微球抗体复合物4度保存荧光信号升高的问题，望各位虫友给点好建议啊！如何稳定保存！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

小木虫

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-01-08 13:53:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

youjihuaxue2000

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
王雨云: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2015-02-02 12:59:55
200nm荧光，你是做免疫层析吗？造成不稳定的原因复杂，但都能归结为微球表面电荷被平衡掉了。两微球靠彼此之间的电荷斥力分开，使整个体系维持溶胶状态。从EDC的加入开始，这种电荷平衡就被打破，后面加入抗体、封闭剂的时候，如果不能回复电荷平衡，体系就是不稳定的。所以，不妨试试：（1）选择表面电荷更多的微球，EDC只活化部分羧基，剩下部分来提供负电荷；（2）选择带同种电荷的blocker。（3）还得找个有经验的人手把手教你，细节很重要，呵呵。
欢迎交流huxuhua2008@163.com

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(4人) 回复此楼
2楼2015-02-02 08:00:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王雨云

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by youjihuaxue2000 at 2015-02-03 07:44:46
pH太高。你可查一下EDC和NHS的水解pH，你把pH调这么高，我怀疑几乎没有共价交联。5.4是最佳的，但不适合。一般用6~6.5。

pH越高标记后的微球抗体复合物活性越低，6左右确实标记出来的微球抗体复合物活性很高，但仍改变不了2-8度保存荧光信号增强的问题。羧基微球理论上在没有EDC存在的情况下也应该可以跟带氨基的抗体反应才对，至于稳定不稳定就很难说了。目前我的实验是通过EDC活化后化学交联抗体的，2-8度保存稳定性还是有问题。2-8度保存后的变化规律一般是先明显升高后总体保持不变，37度热破坏5天内还不容易出现信号减弱的情况。有的人就是通过标记完成后先热破坏再来验证稳定性的。
赞一下(3人) 回复此楼
5楼2015-02-03 08:49:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

deyunliu

禁虫 (知名作家)
本帖内容被屏蔽
8楼2015-03-02 22:02:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

王雨云

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by youjihuaxue2000 at 2015-02-02 08:00:03
200nm荧光，你是做免疫层析吗？造成不稳定的原因复杂，但都能归结为微球表面电荷被平衡掉了。两微球靠彼此之间的电荷斥力分开，使整个体系维持溶胶状态。从EDC的加入开始，这种电荷平衡就被打破，后面加入抗体、封闭 ...

是做免疫层析的，标记pH做过6.0-9.0，用BSA作为封闭蛋白，理论上已经算选择的带同种电荷的blocker了吧。但还是没有改善2-8度保存荧光信号增强的问题。
赞一下 回复此楼
3楼2015-02-02 13:21:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youjihuaxue2000

银虫 (小有名气)
pH太高。你可查一下EDC和NHS的水解pH，你把pH调这么高，我怀疑几乎没有共价交联。5.4是最佳的，但不适合。一般用6~6.5。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2015-02-03 07:44:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youjihuaxue2000

银虫 (小有名气)
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
您提到：（1）荧光信号增强。很可能荧光物质泄漏出来，直接和蛋白质相互作用了，可能两者存在能量共振转移，这会使荧光增强。你不妨问问厂家，微球里面的荧光染料是不是疏水的？并仔细观察：（a）体系是否用了极性较强的有机物？（b）试剂瓶壁或表面是否有一层油一样的东西？（2）羧基微球理论上在没有EDC存在的情况下也应该可以跟带氨基的抗体反应。是的，通过离子键相互作用，但很弱。实际上，即使有EDC活化的情况下，微球首先通过被动吸附和蛋白相互作用，然后才发生共价交联。这些非共价的结合，是后来不稳定的根源之一。你不妨在封闭后加一步3~5min的超声，那些不稳定的结合，自然会脱离下来。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
6楼2015-03-01 01:42:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王雨云

金虫 (小有名气)
1  微球里包埋的是稀土铕，可能是通过溶胀方式包埋的吧，漏出来的可能性应该不是很大。
2  体系中应该没有什么较强的极性有机物。试剂瓶表面未出现油一样的漂浮物，微球本身肉眼可见还是澄清透亮的，感觉单分散性还可以。
3  封闭之后一直有超声的步骤，一般都要超声5min左右。还试过标记完抗体后先离心去除游离的抗体，再加蛋白封闭，结果差别不大。
赞一下 回复此楼
7楼2015-03-02 17:10:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youjihuaxue2000

银虫 (小有名气)
非荧光染料染色的彩球，是我们的常规产品，目前应用广泛，比如流体力学。在诊断上，主要是彩色层析和免疫凝集反应。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
9楼2015-09-17 17:20:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liu198922

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by youjihuaxue2000 at 2015-02-02 08:00:03
200nm荧光，你是做免疫层析吗？造成不稳定的原因复杂，但都能归结为微球表面电荷被平衡掉了。两微球靠彼此之间的电荷斥力分开，使整个体系维持溶胶状态。从EDC的加入开始，这种电荷平衡就被打破，后面加入抗体、封闭 ...

请问楼主解决这个问题了吗？我最近也遇到这样的问题，请问楼主是怎么解决的呢？
赞一下 回复此楼
10楼2016-07-06 10:17:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 王雨云 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +6 苏东坡二世 2026-08-23 6/300 2026-08-27 13:57 by zhangjianl
[基金申请] 青基如何破局 +3 lyz123lyz 2026-08-27 4/200 2026-08-27 13:08 by kulium
[基金申请] 基金不中，共勉 +8 eulota 2026-08-26 8/400 2026-08-27 12:34 by lice_1987
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 04:33 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 科研孤儿太难了 +21 我4大白菜 2026-08-20 22/1100 2026-08-26 11:29 by nlgza
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭