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关于羧基聚苯乙烯微球偶联抗体后的稳定性问题 已有1人参与
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| 0.2um的羧基聚苯乙烯微球，通过EDC活化后偶联一个抗体，微球抗体复合物4度保存稳定性差。主要是4度保存后荧光信号会明显高于刚稀释好的微球的荧光信号，分析原因是聚苯乙烯微球的疏水作用，静电作用等可能导致微球包被抗体后发生部分凝集（肉眼不可见的凝集），通过优化标记抗体的浓度，缓冲液pH，EDC用量等均未能改变微球抗体复合物4度保存荧光信号升高的问题，望各位虫友给点好建议啊！如何稳定保存！ |
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youjihuaxue2000
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您提到：（1）荧光信号增强。很可能荧光物质泄漏出来，直接和蛋白质相互作用了，可能两者存在能量共振转移，这会使荧光增强。你不妨问问厂家，微球里面的荧光染料是不是疏水的？并仔细观察：（a）体系是否用了极性较强的有机物？（b）试剂瓶壁或表面是否有一层油一样的东西？（2）羧基微球理论上在没有EDC存在的情况下也应该可以跟带氨基的抗体反应。是的，通过离子键相互作用，但很弱。实际上，即使有EDC活化的情况下，微球首先通过被动吸附和蛋白相互作用，然后才发生共价交联。这些非共价的结合，是后来不稳定的根源之一。你不妨在封闭后加一步3~5min的超声，那些不稳定的结合，自然会脱离下来。 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
6楼2015-03-01 01:42:06
youjihuaxue2000
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【答案】应助回帖
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王雨云: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2015-02-02 12:59:55
王雨云: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2015-02-02 12:59:55
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200nm荧光，你是做免疫层析吗？造成不稳定的原因复杂，但都能归结为微球表面电荷被平衡掉了。两微球靠彼此之间的电荷斥力分开，使整个体系维持溶胶状态。从EDC的加入开始，这种电荷平衡就被打破，后面加入抗体、封闭剂的时候，如果不能回复电荷平衡，体系就是不稳定的。所以，不妨试试：（1）选择表面电荷更多的微球，EDC只活化部分羧基，剩下部分来提供负电荷；（2）选择带同种电荷的blocker。（3）还得找个有经验的人手把手教你，细节很重要，呵呵。 欢迎交流huxuhua2008@163.com [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
2楼2015-02-02 08:00:03
3楼2015-02-02 13:21:12
youjihuaxue2000
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4楼2015-02-03 07:44:46