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xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)

[求助] 构建真核表达载体时,插入片段两端各包含一部分非cds区的序列,会有影响吗?已有1人参与

也就是Ori与目的基因的cds区中间有一段无用的碱基,会不会对转录起影响?转录后翻译呢,如果有影响,那翻译也不准了吧?
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


xiaohaixie(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-26 20:19:12
你可以看一下其rna表达了没有。你用的是组成型启动子吧,那应该每个时代都在表达,你可以做个半定量pcr
4楼2015-01-26 19:25:28
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-12-30 08:54:12
如果不太长的话我觉得影响不大,如果片段大的话就会对其启动有影响,因为启动子有一些保守的功能区,如果改动太大就会对启动子的保守区有影响。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2014-12-29 21:27:02
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xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 红卫大兵 at 2014-12-29 21:27:02
如果不太长的话我觉得影响不大,如果片段大的话就会对其启动有影响,因为启动子有一些保守的功能区,如果改动太大就会对启动子的保守区有影响。

嗯,现在已经测了转染后基因的表达量,明显增高,能说明这个真核载体基因正常转录吗?
Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
3楼2015-01-26 18:20:08
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xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 红卫大兵 at 2015-01-26 19:25:28
你可以看一下其rna表达了没有。你用的是组成型启动子吧,那应该每个时代都在表达,你可以做个半定量pcr

用的3.1真核表达载体,SV40 ori,已经提了RNA,反转录后做了绝对定量,表达量显著增高,我的疑问是转录出来的mRNA 100%是对的吗?
Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
5楼2015-01-27 14:44:17
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