应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » q RT-PCR
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
71/1返回列表
查看: 788  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

段丹

新虫 (初入文坛)

[交流] q RT-PCR

有做荧光定量pcr 的，用的是荧光染料sybr green 法， 在做标准曲线时，按十倍的稀释梯度稀释了8个，最后三个值退火温度小于80，我跑电泳，最后三个啥也没有，连二聚体的影子都没有，这是什么原因呢，怎么改进呢？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-11-28 19:50:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董博士

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
说明后面三个的DNA浓度稀释的太低了，没有达到扩增的浓度要求
赞一下 回复此楼
医学&统计学
2楼2014-12-02 15:45:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbqlhb

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好厉害，你的稀释倍数应该是由你的原始浓度决定的，正常来说是应该先做一孔原始样本，知道CT值再来决定稀释多少倍。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2014-12-02 16:03:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冷雁孤旅

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
段丹: 金币+1, 嗯，很具体！ 2014-12-10 18:52:38
3楼说的是对的，你可以这样做，先做一个原始样本的的CT值，根据你原始样本的CT值，在决定你的稀释倍数，对于如何确定稀释倍数，你可以通过你的扩增曲线或者CT值来决定，1.CT值大于30  建议减少稀释倍数（你做8个梯度 太多了 建议做5个梯度）2.在扩增曲线上来看的话  稀释相同倍数的话  曲线的间隔一般是相同的 如果样本浓度太低还惊醒稀释的话 其扩增曲线的间隔是不一致的。至于最后三个的退火温度小于80°，分析是因为 CDNA模板浓度太低 导致QPCR扩增结果几乎没有，而形成的引物二聚（你电泳跑胶二聚体 没有 也只能说明二聚体浓度太低 胶上没有 但是QPCR仪器很灵敏 微量也能检测出来） 希望对你有用 手打不容易
赞一下(1人) 回复此楼
生命不息奋斗不止
4楼2014-12-02 17:01:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

段丹

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 冷雁孤旅 at 2014-12-02 17:01:32
3楼说的是对的，你可以这样做，先做一个原始样本的的CT值，根据你原始样本的CT值，在决定你的稀释倍数，对于如何确定稀释倍数，你可以通过你的扩增曲线或者CT值来决定，1.CT值大于30  建议减少稀释倍数（你做8个梯度 ...

嗯，谢谢啦，明白，现在还有个问题啦，我今天做另外一个基因，做了一下原始浓度的，CT 值是23，我按五倍五倍的稀释可以吗？
赞一下 回复此楼
5楼2014-12-10 18:52:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

段丹

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by bbqlhb at 2014-12-02 16:03:08
你好厉害，你的稀释倍数应该是由你的原始浓度决定的，正常来说是应该先做一孔原始样本，知道CT值再来决定稀释多少倍。

那这个额根据ct 值怎么看稀释的浓度呢，
赞一下 回复此楼
6楼2014-12-10 18:53:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbqlhb

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 段丹 at 2014-12-10 18:53:49
那这个额根据ct 值怎么看稀释的浓度呢，...

2次扩增，然后CT值是扩增倍数，就是2的X次方（X是CT值之间的差），然后看你做什么，不同试剂有不同的，但是你可以照上面的来算。
例如：我一次实验40个循环。原始CT是23，稀释10倍的话，CT差是3.32。做5个循环，预估CT值就是23、26、29、33、36。在40的范围之内，实验方案就可行。
赞一下 回复此楼
7楼2014-12-11 09:08:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 段丹 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 339求调剂 +5 烤麦芽 2026-03-27 6/300 2026-03-28 09:17 by 星空星月
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +8 曼111 2026-03-24 9/450 2026-03-28 07:58 by YYYYX1234
[考研] 0703化学求调剂，各位老师看看我！！！ +5 祁祺祺 2026-03-25 5/250 2026-03-27 21:44 by 东方猪猪
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +3 小张zxy张 2026-03-26 5/250 2026-03-27 18:42 by 小张zxy张
[考研] 070300求调剂306分 +3 26要上岸 2026-03-27 3/150 2026-03-27 17:57 by arrow8852
[考研] 安徽大学专硕生物与医药专业(086000)324分，英语已过四六级，六级521，求调剂 +4 美味可乐鸡翅 2026-03-26 4/200 2026-03-27 15:27 by 星空星月
[考研] 求调剂 +3 刘柯@ 2026-03-24 4/200 2026-03-27 11:28 by shangxh
[考研] 342求调剂 +3 加油a李zs 2026-03-26 3/150 2026-03-27 00:29 by wxiongid
[考研] 一志愿郑州大学，080500学硕，总分317分求调剂 +4 举个栗子oi 2026-03-24 5/250 2026-03-26 23:15 by 不吃魚的貓
[考研] 333求调剂 +6 wfh030413@ 2026-03-23 6/300 2026-03-26 22:45 by 学员8dgXkO
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +17 RichLi_ 2026-03-25 17/850 2026-03-26 19:44 by plmuchong
[考研] 340求调剂 +3 Amber00 2026-03-26 3/150 2026-03-26 18:57 by 不吃魚的貓
[考研] 寻找调剂 +5 倔强芒? 2026-03-21 8/400 2026-03-26 13:25 by 0906ljy
[考研] 26考研-291分-厦门大学（085601）-柔性电子学院材料工程专业求调剂 +3 min3 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:22 by xcjcqu
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 289材料与化工（085600）B区求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-22 5/250 2026-03-25 08:20 by mx.yue
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 考研调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭