| 查看: 793 | 回复: 6 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
q RT-PCR
|
|||
| 有做荧光定量pcr 的，用的是荧光染料sybr green 法， 在做标准曲线时，按十倍的稀释梯度稀释了8个，最后三个值退火温度小于80，我跑电泳，最后三个啥也没有，连二聚体的影子都没有，这是什么原因呢，怎么改进呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有213人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
6楼2014-12-10 18:53:49
董博士
金虫 (正式写手)
- 应助: 155 (高中生)
- 金币: 3129.9
- 红花: 24
- 帖子: 312
- 在线: 96.2小时
- 虫号: 3524307
- 注册: 2014-11-07
- 专业: 医学图像数据处理与分析
2楼2014-12-02 15:45:58
bbqlhb
木虫 (小有名气)
- 应助: 70 (初中生)
- 金币: 1818.6
- 红花: 11
- 帖子: 267
- 在线: 127.3小时
- 虫号: 3365870
- 注册: 2014-08-14
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2014-12-02 16:03:08
冷雁孤旅
木虫 (著名写手)
- 应助: 39 (小学生)
- 金币: 3724.6
- 散金: 600
- 红花: 22
- 帖子: 1767
- 在线: 525.6小时
- 虫号: 1816501
- 注册: 2012-05-14
- 专业: 环境微生物学
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
段丹: 金币+1, 嗯，很具体！ 2014-12-10 18:52:38
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
段丹: 金币+1, 嗯，很具体！ 2014-12-10 18:52:38
| 3楼说的是对的，你可以这样做，先做一个原始样本的的CT值，根据你原始样本的CT值，在决定你的稀释倍数，对于如何确定稀释倍数，你可以通过你的扩增曲线或者CT值来决定，1.CT值大于30 建议减少稀释倍数（你做8个梯度 太多了 建议做5个梯度）2.在扩增曲线上来看的话 稀释相同倍数的话 曲线的间隔一般是相同的 如果样本浓度太低还惊醒稀释的话 其扩增曲线的间隔是不一致的。至于最后三个的退火温度小于80°，分析是因为 CDNA模板浓度太低 导致QPCR扩增结果几乎没有，而形成的引物二聚（你电泳跑胶二聚体 没有 也只能说明二聚体浓度太低 胶上没有 但是QPCR仪器很灵敏 微量也能检测出来） 希望对你有用 手打不容易 |
4楼2014-12-02 17:01:32
