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huisawang木虫 (正式写手)
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[求助]
如何构建重组质粒转染后稳定表达的细胞系
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利用pCDNA4构建重组质粒转染细胞后，如何构建稳定表达的细胞系？具体如何操作？如何筛选？新手一枚求大神尽量详细指教。 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
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huisawang
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3楼2014-11-27 10:23:41
【答案】应助回帖
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huisawang: 金币+2, ★有帮助 2015-05-06 13:25:26
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huisawang: 金币+2, ★有帮助 2015-05-06 13:25:26
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找个酶切位点将载体线性化吧，确保这个酶切位点不影响抗性基因和母的基因的表达！ 不同的cell line会有不同的转染方法，可以电转，脂质体转，P-PEI转等等，转完后24h加药筛选！如果不需要单克隆的话，到时可以直接将所有的细胞克隆形成一个pool就行了。 PS：如果没有合适的线性化酶切位点的话也可以直接转质粒进去，我也这样做过！ |
2楼2014-11-26 23:46:41
huisawang
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4楼2014-11-27 19:56:29
5楼2014-11-27 22:39:38