24小时热门版块排行榜    

查看: 2272  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

阿玮要逃走

新虫 (初入文坛)

[求助] 天然蛋白纯化出问题,无法挂柱!阳离子,阴离子,疏水,都没办法!求大神解救! 已有5人参与

本人做水产的,从章鱼中纯化天然蛋白,现在已知目的蛋白是磷酸丙糖异构酶。
有研究显示是酸性蛋白,但是我采用ph 8.5  20mM tris-HCl  上Q-sepharose强阴,没有办法吸附。目的蛋白直接就下来了……
然后将未吸附采用pH 6.5 20mM PBS 透析之后,上SP-Sepharose阳离子柱,也是没有办法吸附……目的蛋白又直接下来了……
采用阴离子之后的上AKTA 5ml 的 phenly FF ,1M的硫酸铵,pH 8.0  也是没有办法吸附………………
求助大神,这应该怎么解决啊?!

紧急求救!!!!!老板要把我逼死了……
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liaohongjun

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你目标蛋白浓度是不很低?建议试试弱的例子交换树脂,调整合适的盐浓度及pH值!
5楼2014-11-27 09:53:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

jiangwy09

新虫 (初入文坛)

那就用分子筛试试,或者把ph值在提高到10左右试试,不行就加点低盐
2楼2014-11-26 19:18:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tautou2012

铜虫 (小有名气)

目的蛋白有没有查到等电点?

[ 发自小木虫客户端 ]
天然蛋白纯化
3楼2014-11-26 21:50:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crazybb1130

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以试试反相柱,反相柱比疏水柱结合蛋白能力强,试试HAc/NaAc缓冲体系+60%乙醇洗脱,逐步降低缓冲体系的pH。
4楼2014-11-27 09:24:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见