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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 强阴离子交换柱，流穿问题
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janelss

铁虫 (初入文坛)

[求助] 强阴离子交换柱，流穿问题

我的目标蛋白质PI是7.0 用强阴离子交换柱，缓冲液PH=8.5， 无论怎么做，目标蛋白质总是出现在流穿中，操作，溶液什么的都没有问题，这是为什么。
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1楼 2013-06-17 09:31:41
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
janelss: 金币+10 2013-06-21 09:10:13
强阴离子不是指结合能力强，指的是结合范围宽泛。你可以采用降低上样离子强度的方法来解决这个问题。不过，即然你的样品的pI是7.0，缓冲液调8.5，完全可以用弱阴做，这样可以最大程度的去除杂质。多试试
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8楼2013-06-19 15:33:05
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普通回帖

ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
janelss: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-06-21 09:10:02
上样盐浓度多少？PI是综合的所有氨基酸的计算值，实际过离子交换的时候只于蛋白质表面的氨基酸相互作用，PI仅供参考。用几种树脂，多个条件孵育，看看和什么条件能结合。祝顺利。
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2楼2013-06-17 09:53:14
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dengyuxq

金虫 (小有名气)
是不是溶液里面杂蛋白较多或者色素很深，我们也遇到过，因为色素太深了就挂不上柱子，先使用疏水或者其他柱子除去一部分杂蛋白和色素之后就能挂上了！
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janelss
3楼2013-06-18 16:50:25
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
你怎么知道你的蛋白质的等电点？
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2013-06-19 04:10:07
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janelss

铁虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by dengyuxq at 2013-06-18 16:50:25
是不是溶液里面杂蛋白较多或者色素很深，我们也遇到过，因为色素太深了就挂不上柱子，先使用疏水或者其他柱子除去一部分杂蛋白和色素之后就能挂上了！

哦，应该是因为色素物质太多的缘故，再问下有哪些方法能除色素，顺便提一下，我的目标物质是血红素蛋白质，也算一种色素物质吧。
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5楼2013-06-19 08:43:53
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
哥们，你为什么要用强离子的呢？强的本来就结合能力强，不是特别好洗下来的。
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6楼2013-06-19 08:53:02
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greety0918

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
janelss: 金币+10 2013-06-21 09:10:29
对啊,为什么要用强阴的啊,很容易变性的,可以尝试适当提高pH到9,另外你的缓冲液是不是离子强度太高了,还是有洗脱盐
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janelss
终于硕士毕业了,解放ing
7楼2013-06-19 15:28:20
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janelss

铁虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by greety0918 at 2013-06-19 15:28:20
对啊,为什么要用强阴的啊,很容易变性的,可以尝试适当提高pH到9,另外你的缓冲液是不是离子强度太高了,还是有洗脱盐

呵呵 好像是上样时有点离子浓度。
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9楼2013-06-19 18:02:36
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Stefanie旭

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我是来学习一下滴，接下来我打算用弱碱性阴离子交换树脂，吸附霉菌分泌的抑菌物质。。。但确实，有资料说强酸或强碱的离子交换树脂，第一很难洗脱下来，第二，容易使样品变性。。甚至还要注意树脂本身的损坏。。。慎重选择吸附目标噢
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我们都是宇宙中独一无二的个体，真正意识到这一点，那自卑便从人世间消失了
10楼2013-06-20 10:14:29
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