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ynkuaile

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【答案】应助回帖

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janelss: 金币+20, ★★★很有帮助 2013-06-21 09:07:53

2楼第一句话就问上样盐浓度多少。你该考虑一下的。另外，你说你的蛋白是血红素蛋白，那么这个颜色就是铁卟啉被氧化后的颜色。这个还是别除去的好。强阴不是特别好洗脱，但是一个梯度，如果出峰时盐浓度很高，换弱的也可以，关键是强阴的都不结合，为何还推荐用弱阴的呢？谁能解小弟疑惑呢？（强阴离子交换柱，缓冲液PH=8.5，无论怎么做，目标蛋白质总是出现在流穿中）。强阴不结合，推荐用弱阴？
阴离子柱，能吸附负电的东西，卟啉环感觉应该能与阴离子柱作用吧，如果是这样，可能会将蛋白与辅基分开，这是不好的结果，当然，这是我的想法，是否会这样要看实验，愿做过类似的能告知一下，是否会脱辅基。

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11楼2013-06-20 23:53:10

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wolfman840

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强阴和弱阴是阴离子柱作用pH范围的区别，和吸附强度不是一个事情。离子柱吸附强度决定的，是样品本身的带电荷情况。一般来说，弱阴离子柱对于同一样品处理分辨率要高于同基质的强阴离子的柱子。
在这个例子中，阴离子柱在pH8.5的环境下，吸附等电点pH7.0的样品原理上来说是正确的，问题可能出在离子强度上，因为做离子交换需要低离子强度的缓冲液环境，高离子强度的缓冲液可以和柱子配基发生离子交换，将蛋白竞争性的解离下来，造成蛋白流穿。所以建议用弱阴+低离子强度缓冲液来进行上样。如果这样还流穿，我觉得楼主直接用流穿模式进行样品纯化，或者换一种纯化方法。

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12楼2013-06-21 11:11:28

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芝麻粒

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用NaOH复活一下试试

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13楼2014-09-01 11:06:37

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