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阿玮要逃走

新虫 (初入文坛)

[求助] 天然蛋白纯化出问题,无法挂柱!阳离子,阴离子,疏水,都没办法!求大神解救! 已有5人参与

本人做水产的,从章鱼中纯化天然蛋白,现在已知目的蛋白是磷酸丙糖异构酶。
有研究显示是酸性蛋白,但是我采用ph 8.5  20mM tris-HCl  上Q-sepharose强阴,没有办法吸附。目的蛋白直接就下来了……
然后将未吸附采用pH 6.5 20mM PBS 透析之后,上SP-Sepharose阳离子柱,也是没有办法吸附……目的蛋白又直接下来了……
采用阴离子之后的上AKTA 5ml 的 phenly FF ,1M的硫酸铵,pH 8.0  也是没有办法吸附………………
求助大神,这应该怎么解决啊?!

紧急求救!!!!!老板要把我逼死了……
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jiangwy09

新虫 (初入文坛)

那就用分子筛试试,或者把ph值在提高到10左右试试,不行就加点低盐
2楼2014-11-26 19:18:49
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tautou2012

铜虫 (小有名气)

目的蛋白有没有查到等电点?

[ 发自小木虫客户端 ]
天然蛋白纯化
3楼2014-11-26 21:50:29
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crazybb1130

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以试试反相柱,反相柱比疏水柱结合蛋白能力强,试试HAc/NaAc缓冲体系+60%乙醇洗脱,逐步降低缓冲体系的pH。
4楼2014-11-27 09:24:09
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liaohongjun

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你目标蛋白浓度是不很低?建议试试弱的例子交换树脂,调整合适的盐浓度及pH值!
5楼2014-11-27 09:53:20
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jason1124

新虫 (初入文坛)

请问楼主问题解决了吗,我也遇到什么柱都不挂的问题,求大神啊,【哭】
6楼2015-09-10 09:14:45
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by jason1124 at 2015-09-10 09:14:45
请问楼主问题解决了吗,我也遇到什么柱都不挂的问题,求大神啊,【哭】

换DEAE或者CM,疏水的可以换丁基的。祝顺利、
7楼2015-10-13 11:32:31
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

换DEAE离子柱做纯化咯,天然蛋白纯化本来就是要试多种纯化方式,很少有一步到位的。为什么不考虑重组蛋白表达
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
8楼2015-10-22 09:28:18
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mao877516786

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

建议可以尝试一下大孔吸附柱。
9楼2015-10-22 17:24:00
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