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janelss

铁虫 (初入文坛)

[求助] 强阴离子交换柱,流穿问题

我的目标蛋白质PI是7.0 用强阴离子交换柱,缓冲液PH=8.5, 无论怎么做,目标蛋白质总是出现在流穿中,操作,溶液什么的都没有问题,这是为什么。
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janelss

铁虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by greety0918 at 2013-06-19 15:28:20
对啊,为什么要用强阴的啊,很容易变性的,可以尝试适当提高pH到9,另外你的缓冲液是不是离子强度太高了,还是有洗脱盐

呵呵 好像是上样时有点离子浓度。
9楼2013-06-19 18:02:36
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
janelss: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-06-21 09:10:02
上样盐浓度多少?PI是综合的所有氨基酸的计算值,实际过离子交换的时候只于蛋白质表面的氨基酸相互作用,PI仅供参考。用几种树脂,多个条件孵育,看看和什么条件能结合。祝顺利。
2楼2013-06-17 09:53:14
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dengyuxq

金虫 (小有名气)

是不是溶液里面杂蛋白较多或者色素很深,我们也遇到过,因为色素太深了就挂不上柱子,先使用疏水或者其他柱子除去一部分杂蛋白和色素之后就能挂上了!

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2013-06-18 16:50:25
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

你怎么知道你的蛋白质的等电点?
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2013-06-19 04:10:07
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