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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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梓汐

铁虫 (正式写手)

[求助] 麻烦帮看看 P出来的目的条带很浅 已有4人参与

F:5'-GAGGCGATCGC GTTGTGGAGAGAGGGAGGT  -3'
R1:5'-CTAGCGGCCGC AGGTTTCTGAAGCTCAACTATG -3'
Tm值说是72℃    因为加酶切位点和保护碱基  实际引物Tm值是53-54℃
按95℃  5min
95℃  45s
61℃  45s
72℃ 45s
95℃  45s
68℃  45s
72℃ 45s     
5-7  30cycle
72℃ 20min
4℃    forever

体系里上下游引物和模板都是1ul     目的片段很暗   以PCR产物20ul为模板(40ul体系)P出来光有二聚体

麻烦帮看看  P出来的目的条带很浅
mir-345 20141120.jpg
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
降低退火温度。
产物多大?看你的marker应该过1k了,延伸时间可以延长。
或者使用梯度PCR试试。
4楼2014-11-25 15:22:48
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
降低温度试试,或者加大模板量,引物二聚体没有关系的

[ 发自小木虫客户端 ]
踏实
2楼2014-11-24 23:21:32
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚:专业/专注/专心

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
加大模板量并适当降低退火温度,只要你的目的条带能P出来,有点引物二聚体没什么关系。
年末优惠荧光定量pcr、WB、ELISA技术服务一律六折!交流锤炼知识,用心构筑桥梁,以更优质的产品及技术服务助力科研;QQ:2513165427;Email:b
3楼2014-11-25 15:11:01
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rb

木虫 (著名写手)

小笨虫虫

【答案】应助回帖

用62-57的touchdown,加一点镁离子。
寝室楼的大爷、大妈都是哲学家,他们每天都在思考人类最根本的三个问题:你是谁?你从哪儿来?要去哪儿?
5楼2014-11-28 15:35:07
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