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southern blot
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| 各位大侠赐教，southern blot实验中，Parafilm 膜如何包绕凝胶?20XSSC转移缓冲液用的时候需要稀释成1X的吗？ |
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伊梦青lhq: 金币+7 2014-11-27 14:50:20
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| DNA的变性、转膜装置组装和转膜： 1、带电荷的尼龙膜： 将凝胶浸入数倍体积的碱性转移缓冲溶液中，室温振荡15min。 更换一次碱性缓冲溶液继续浸泡20min。 2、切一张每边比凝胶大1mm的尼龙膜，并剪两张同样大小的厚吸水纸。（注意：需带一次性PE手套和钝头镊子，沾有油污的膜不易浸湿。） 3、将膜飘浮于盛有去离子水的平皿中，直到其完全浸湿后，将其浸入适当的转移缓冲溶液中至少5min，用干净的解剖刀切下膜的一角，与凝胶所切下的角一致。（注意：膜的浸湿完全与否，对DNA的转移至关重要。浸湿的膜可保存在高压的2×SSC饱和的3MM滤纸中，4℃保存。） 4、将一张厚的吸水纸放在一片树脂玻璃板或平皿上，形成比凝胶长且宽的支持物。将支持物或皿放入一个大的干烤皿中，吸水纸两端从板边缘垂下。 5、干烤皿中加入适当的转移缓冲液，直到液面几乎与支持物表面平齐。当支持物上的吸水纸完全浸湿后，用玻璃棒赶走吸水纸下的气泡。 6、将凝胶从变性液/碱性缓冲液中取出，倒转使原来的底面向上。放在支持物上，并位于吸水纸中央。用玻璃棒赶走凝胶与吸水纸间的气泡。 7、用Parafilm膜包绕凝胶四周，不要覆盖凝胶。以屏蔽转移缓冲液从凝胶周围短路流入吸水纸。 |
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