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Z深白色J

新虫 (初入文坛)

[求助] RNA质量好坏会影响后期荧光定量结果吗? 已有2人参与

最近一直在提RNA,因为老师觉得提的质量不是很好。我想问一下RNA浓度在多少范围就能做荧光定量,我一般提的在500ng/ul以上。如500ng/ul和1000ng/ul的RNA同时反转录成CDNA后(根据试剂盒RNA浓度最终统一为1000),将CDNA稀释成200ng/ul进行荧光定量,结果会不同吗?希望各位帮忙指导一下,平时一个人做实验,需要各位出谋划策,谢谢!
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古韵清音

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-11-13 23:44:28
500已经够高了,你老师说的质量不行应该不是指浓度,260/280多少?1.8~2.0之间的RNA才可以用来荧光定量
2楼2014-11-13 23:25:18
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
浓度对最后质量影响不是主要的,所有浓度都需要稀释到QPCR要求浓度。
RNA质量是最关键的,要看A260/280及A260/230的值,以及RNA电泳结果,
若混有DNA,或多糖之类,则结果不可信,因为不同样品混有DNA量不同的话,就会对RNA反转录效率,以及最终CDNA浓度造成影响,并造成QPCR结果不准或不可信。
3楼2014-11-14 08:32:59
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