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新虫 (初入文坛)

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[求助] RNA质量好坏会影响后期荧光定量结果吗？已有2人参与

最近一直在提RNA，因为老师觉得提的质量不是很好。我想问一下RNA浓度在多少范围就能做荧光定量，我一般提的在500ng/ul以上。如500ng/ul和1000ng/ul的RNA同时反转录成CDNA后（根据试剂盒RNA浓度最终统一为1000），将CDNA稀释成200ng/ul进行荧光定量，结果会不同吗？希望各位帮忙指导一下，平时一个人做实验，需要各位出谋划策，谢谢！

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1楼 2014-11-13 20:51:04

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chenguestc

木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

浓度对最后质量影响不是主要的，所有浓度都需要稀释到QPCR要求浓度。
RNA质量是最关键的，要看A260/280及A260/230的值，以及RNA电泳结果，
若混有DNA，或多糖之类，则结果不可信，因为不同样品混有DNA量不同的话，就会对RNA反转录效率，以及最终CDNA浓度造成影响，并造成QPCR结果不准或不可信。