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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 插入失活筛选
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爱笑的眼睛然

新虫 (初入文坛)

[交流] 插入失活筛选 已有1人参与

本人最近在做乳酸菌的基因敲除实验，基础知识比较薄弱，用的方案是插入失活，在目的基因的中间插入四环素抗性基因，电转后平板上会长几个单菌落，接到液体里会长（含四环素抗性）然后PCR验证四环素基因都有，但是P目的基因+四环素却没有，求助大神指点一二，是否是我筛选方法有问题？还是另有其他的筛选方法？还有就是能P出四环素基因，是否证明该质粒已经整合到染色体的目的基因处？
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ankey呦

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1楼 2014-11-13 20:26:24
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ankey呦

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送红花一朵
你好，我也是做基因敲除的，你的实验进展顺利吗？可否传授点经验呢？你用的是什么载体构建的自杀性质粒呢？
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2楼2015-03-27 10:13:44
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