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xy656691

金虫 (正式写手)

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[求助] BIFC实验，会因为A、B和YNE、YCE的不同组合导致实验结果不同吗？已有3人参与

Ａ蛋白融合在YNE，B蛋白融合在YCE。观察到YFP荧光；B蛋白在融合YNE，A蛋白融合在YCE。观察不到YFP荧光。这样问题就来了！！！
1，这能说明AB蛋白能够相互作用吗？
2，出现这种情况是否因为不同组合形成的融合蛋白导致A、B蛋白暴露出的结合位点不同？

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1楼2014-11-01 17:25:03

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sun_in_night

木虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
xy656691: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢，之前不知道fret这个实验。 2014-11-06 09:20:15

个人其实不推荐用Y2H,因为如果不是酵母蛋白，而是其他物种蛋白，那么蛋白在酵母中的表达形态，量度，位置等等有可能完全和原来物种中的不一样。所以现在一般Y2H只是用来做筛选互作蛋白，但是进一步鉴定一般用其他方法，像你用的BiFC，还有Fret，pull down等等。但是每种方法都各有利弊，所以一般会用多种方法相结合来验证蛋白互作。