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xy656691

金虫 (正式写手)

[求助] BIFC实验,会因为A、B和YNE、YCE的不同组合导致实验结果不同吗?已有3人参与

A蛋白融合在YNE,B蛋白融合在YCE。观察到YFP荧光;B蛋白在融合YNE,A蛋白融合在YCE。观察不到YFP荧光。这样问题就来了!!!
1,这能说明AB蛋白能够相互作用吗?
2,出现这种情况是否因为不同组合形成的融合蛋白导致A、B蛋白暴露出的结合位点不同?
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AQ-Bio-Z

新虫 (初入文坛)

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★ ★
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xy656691: 金币+2, ★★★很有帮助, 这样也是很有必要啊! 2014-11-02 18:51:05
没考虑你这样的想法,需要检测YC与B_Yn和A_Yc与YN

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-11-01 17:37:44
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xy656691: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-11-03 20:25:22
这就是这个方法的缺陷之一了,不同的连接方法很可能造成了相互作用位点距离过远或者被遮盖。因此对于蛋白相互作用需要做多种方法。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
3楼2014-11-02 19:26:35
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xy656691

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by starseacow at 2014-11-02 19:26:35
这就是这个方法的缺陷之一了,不同的连接方法很可能造成了相互作用位点距离过远或者被遮盖。因此对于蛋白相互作用需要做多种方法。

谢谢,酵母双杂交实验是不是存在同样的缺陷?如果用其他方法证明,最好用什么呢?pull down 还是 western?
4楼2014-11-03 20:25:12
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xy656691 at 2014-11-03 20:25:12
谢谢,酵母双杂交实验是不是存在同样的缺陷?如果用其他方法证明,最好用什么呢?pull down 还是 western?...

酵母双杂问题不在这里。你可以用酵母双杂加BiFC说明问题,每个方法都做western验证蛋白表达。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
5楼2014-11-04 00:34:40
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xy656691

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by starseacow at 2014-11-04 00:34:40
酵母双杂问题不在这里。你可以用酵母双杂加BiFC说明问题,每个方法都做western验证蛋白表达。...

酵母双杂交实验要互换载体验证吗?(A蛋白融合在AD,B蛋白融合在BD。检测β-半乳糖苷酶;B蛋白在融合AD,A蛋白融合在BD,再次检测β-半乳糖苷酶)
6楼2014-11-05 20:59:14
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sun_in_night

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
xy656691: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢,之前不知道fret这个实验。 2014-11-06 09:20:15
个人其实不推荐用Y2H,因为如果不是酵母蛋白,而是其他物种蛋白,那么蛋白在酵母中的表达形态,量度,位置等等有可能完全和原来物种中的不一样。所以现在一般Y2H只是用来做筛选互作蛋白,但是进一步鉴定一般用其他方法,像你用的BiFC,还有Fret,pull down等等。但是每种方法都各有利弊,所以一般会用多种方法相结合来验证蛋白互作。
7楼2014-11-06 02:38:45
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本帖内容被屏蔽

8楼2022-07-10 11:02:35
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