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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 实验技术 » BIFC实验，会因为A、B和YNE、YCE的不同组合导致实验结果不同吗？
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xy656691

金虫 (正式写手)

[求助] BIFC实验，会因为A、B和YNE、YCE的不同组合导致实验结果不同吗？ 已有3人参与

Ａ蛋白融合在YNE，B蛋白融合在YCE。观察到YFP荧光；B蛋白在融合YNE，A蛋白融合在YCE。观察不到YFP荧光。这样问题就来了！！！
1，这能说明AB蛋白能够相互作用吗？
2，出现这种情况是否因为不同组合形成的融合蛋白导致A、B蛋白暴露出的结合位点不同？
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1楼 2014-11-01 17:25:03
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AQ-Bio-Z

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xy656691: 金币+2, ★★★很有帮助, 这样也是很有必要啊！ 2014-11-02 18:51:05
没考虑你这样的想法，需要检测YC与B_Yn和A_Yc与YN

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-11-01 17:37:44
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xy656691: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-11-03 20:25:22
这就是这个方法的缺陷之一了，不同的连接方法很可能造成了相互作用位点距离过远或者被遮盖。因此对于蛋白相互作用需要做多种方法。
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3楼2014-11-02 19:26:35
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xy656691

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by starseacow at 2014-11-02 19:26:35
这就是这个方法的缺陷之一了，不同的连接方法很可能造成了相互作用位点距离过远或者被遮盖。因此对于蛋白相互作用需要做多种方法。

谢谢，酵母双杂交实验是不是存在同样的缺陷？如果用其他方法证明，最好用什么呢？pull down 还是 western?
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4楼2014-11-03 20:25:12
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xy656691 at 2014-11-03 20:25:12
谢谢，酵母双杂交实验是不是存在同样的缺陷？如果用其他方法证明，最好用什么呢？pull down 还是 western?...

酵母双杂问题不在这里。你可以用酵母双杂加BiFC说明问题，每个方法都做western验证蛋白表达。
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5楼2014-11-04 00:34:40
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xy656691

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by starseacow at 2014-11-04 00:34:40
酵母双杂问题不在这里。你可以用酵母双杂加BiFC说明问题，每个方法都做western验证蛋白表达。...

酵母双杂交实验要互换载体验证吗？（Ａ蛋白融合在AD，B蛋白融合在BD。检测β-半乳糖苷酶；B蛋白在融合AD，A蛋白融合在BD，再次检测β-半乳糖苷酶）
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6楼2014-11-05 20:59:14
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sun_in_night

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
xy656691: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢，之前不知道fret这个实验。 2014-11-06 09:20:15
个人其实不推荐用Y2H,因为如果不是酵母蛋白，而是其他物种蛋白，那么蛋白在酵母中的表达形态，量度，位置等等有可能完全和原来物种中的不一样。所以现在一般Y2H只是用来做筛选互作蛋白，但是进一步鉴定一般用其他方法，像你用的BiFC，还有Fret，pull down等等。但是每种方法都各有利弊，所以一般会用多种方法相结合来验证蛋白互作。
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7楼2014-11-06 02:38:45
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hgp157

禁虫
本帖内容被屏蔽
8楼2022-07-10 11:02:35
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