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xy656691

金虫 (正式写手)

[求助] BIFC实验,会因为A、B和YNE、YCE的不同组合导致实验结果不同吗?已有3人参与

A蛋白融合在YNE,B蛋白融合在YCE。观察到YFP荧光;B蛋白在融合YNE,A蛋白融合在YCE。观察不到YFP荧光。这样问题就来了!!!
1,这能说明AB蛋白能够相互作用吗?
2,出现这种情况是否因为不同组合形成的融合蛋白导致A、B蛋白暴露出的结合位点不同?
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xy656691

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by starseacow at 2014-11-02 19:26:35
这就是这个方法的缺陷之一了,不同的连接方法很可能造成了相互作用位点距离过远或者被遮盖。因此对于蛋白相互作用需要做多种方法。

谢谢,酵母双杂交实验是不是存在同样的缺陷?如果用其他方法证明,最好用什么呢?pull down 还是 western?
4楼2014-11-03 20:25:12
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xy656691

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by starseacow at 2014-11-04 00:34:40
酵母双杂问题不在这里。你可以用酵母双杂加BiFC说明问题,每个方法都做western验证蛋白表达。...

酵母双杂交实验要互换载体验证吗?(A蛋白融合在AD,B蛋白融合在BD。检测β-半乳糖苷酶;B蛋白在融合AD,A蛋白融合在BD,再次检测β-半乳糖苷酶)
6楼2014-11-05 20:59:14
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