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xy656691

金虫 (正式写手)

[求助] BIFC实验,会因为A、B和YNE、YCE的不同组合导致实验结果不同吗? 已有3人参与

A蛋白融合在YNE,B蛋白融合在YCE。观察到YFP荧光;B蛋白在融合YNE,A蛋白融合在YCE。观察不到YFP荧光。这样问题就来了!!!
1,这能说明AB蛋白能够相互作用吗?
2,出现这种情况是否因为不同组合形成的融合蛋白导致A、B蛋白暴露出的结合位点不同?
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xy656691: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-11-03 20:25:22
这就是这个方法的缺陷之一了,不同的连接方法很可能造成了相互作用位点距离过远或者被遮盖。因此对于蛋白相互作用需要做多种方法。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
3楼2014-11-02 19:26:35
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AQ-Bio-Z

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xy656691: 金币+2, ★★★很有帮助, 这样也是很有必要啊! 2014-11-02 18:51:05
没考虑你这样的想法,需要检测YC与B_Yn和A_Yc与YN

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-11-01 17:37:44
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xy656691

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by starseacow at 2014-11-02 19:26:35
这就是这个方法的缺陷之一了,不同的连接方法很可能造成了相互作用位点距离过远或者被遮盖。因此对于蛋白相互作用需要做多种方法。

谢谢,酵母双杂交实验是不是存在同样的缺陷?如果用其他方法证明,最好用什么呢?pull down 还是 western?
4楼2014-11-03 20:25:12
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xy656691 at 2014-11-03 20:25:12
谢谢,酵母双杂交实验是不是存在同样的缺陷?如果用其他方法证明,最好用什么呢?pull down 还是 western?...

酵母双杂问题不在这里。你可以用酵母双杂加BiFC说明问题,每个方法都做western验证蛋白表达。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
5楼2014-11-04 00:34:40
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