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荧光定量PCR试验中,自设探针和引物使得阴性对照跑出曲线,求分析原因?
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| 自己设计了一对引物,跑普通PCR鉴别抗原没有问题,后来根据引物设计了探针,现在上荧光定量探针和引物同时加入做阴性对照都会跑出曲线,常理应该是靠近0基线的直线,调整了引物和探针的自身浓度,配比,均还是有曲线产生,通过软件分析引物和探针也不发生聚合反应,求助有没有其他原因导致此结果,现阶段还在摸索引物和探针配比浓度。探针和引物配比做过1:1,1:2,1:4(20uL体系中),浓度也还在摸索。 |
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