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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 求大神相助~~~琼脂糖电泳~~~
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GdNit

新虫 (初入文坛)

[求助] 求大神相助~~~琼脂糖电泳~~~ 已有2人参与

现在我做的实验的是DNA的损伤实验，对生物学简直是一丁点都不了解，就跟着前辈们的方法步骤做~~但是，问题巨多~~~实验做了大半年都没有进展。

  缓冲液用的是TBE
  琼脂糖和TBE混合后制胶在微波炉里面加热，直到混合液变澄清。等到混合液温度降到78°的时候加10μL的EB。然后让胶冷却两个小时以上。最后加样，通电跑胶，100V,30mA，跑胶16个小时，跑胶的时候还要再电泳槽两端各加20μL的EB。
问题是我同样的只是灭菌过得超纯水，在胶的两个地方跑出来的结果相差巨大（同一块胶），不知道这是什么问题？
并且应该根据浓度梯度得出来的数据也是乱七八糟一点规律性都没有。有时候甚至样品对DNA的损伤还会小于灭菌后的水对DNA的损伤。
电泳槽之前坏过，用有机溶液粘好了。

  各位大神能不能看出是哪个方面出了问题啊？？？？？

按我上面说的方法师兄师姐都做出来结果的。。。。
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1楼 2014-10-20 00:31:47
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Devil_Jimmy

银虫 (小有名气)
为何我跑DNA半小时的时候看了下，还是有条带的 ，再跑半小时后，什么也没有了，是因为我用的胶太小了，DNA都跑到缓冲液里了？我的marker是250的  目的基因514bp的 。
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神外
7楼2014-10-21 12:04:29
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查看全部 8 个回答

moppie

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换个新的电泳槽吧，我们之前跑胶也经常乱七八糟，买个新的，现在不会啦。。

[ 发自小木虫客户端 ]
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不再年轻，青春不走。
2楼2014-10-20 00:51:38
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GdNit

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by moppie at 2014-10-20 00:51:38
换个新的电泳槽吧，我们之前跑胶也经常乱七八糟，买个新的，现在不会啦。。

你们换了电泳槽之后，跑出来的结果就好了？方法什么的也和之前一样吗？
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3楼2014-10-20 13:44:33
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主应该上电泳图，然后才好分析原因。
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4楼2014-10-20 14:50:18
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