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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 乳酸乳球菌代谢产物的分离纯化求助
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reaper2011

新虫 (初入文坛)

[求助] 乳酸乳球菌代谢产物的分离纯化求助已有3人参与

各位大侠，实验室自己分离了一株乳酸乳球菌，能产生抗菌物质，排除了乳酸和过氧化氢抑菌的可能，根据文献说，这类菌会产生种细菌素或类细菌素的抗菌物质，可能是蛋白结构，所以做了蛋白酶的酶解实验，发现只能是减少40%的抑菌性。调节PH，做PH梯度实验，发现从2到10，在ph=3.5的时候抑菌最大，在7以后就几乎没有抑菌率了。但是，老板比较执着。。。。。就推测是蛋白性质的物质，让我分离。我使用了硫酸铵沉淀，从20%到90%，发现没有沉淀下来。
做了乙酸乙酯，氯仿甲醇的有机溶剂萃取，没有萃取出来。
为了减少培养基的杂蛋白的干扰，减少分离的难度，我使用了优化后的培养基，用无机氮源代替了有机氮源，后来我做了乙醇的沉淀实验，因为无机氮源用的是硫酸铵，加的乙醇的终浓度是80%，有一种乙醇硫酸铵双水相萃取的感觉，白花花的全是沉淀，但是没有抑菌性，而上清液的抑菌性比原来没有用乙醇沉淀的要高。然后听一大神的建议使用D101大孔树脂进行分离，现在想求助一下各位大神们：
一 在大孔树脂的分离过程中，含有目标物质的溶液的PH，会不会影响大孔树脂的吸附？因为我看文献上有的调节了，有的没有调节，有师兄说如果调节pH可能会才纯化的过程中人为的产生新的物质干扰后续的分离。
二 我使用大孔树脂进行吸附的时候，目前的情况，我因为树脂的类型没有确定，只是在做静态吸附试验，而且我的目的就是分离出来就可以了，我在做静态吸附试验的时候，树脂的单位最大承载量（就是那种过载不过载）我要不要测啊？因为我发现我树脂加的少了，在PH=7的时候是可以吸附上去的，但是加多了就不行了。
三 就是还能不能给点分离的经验或者关于还有别的什么其他的材料可以分离这东西的啊，本人以前学食品的，这东西是门外汉，谢谢各位啦。
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1楼2014-10-15 00:21:38
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reaper2011

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 0ceaney at 2014-10-15 08:46:10
我觉得抑菌物质就是Nisin吧，那是个多肽，可稳定了，特别小，貌似就20多个氨基酸。。你可以去查一查Nisin相关文献。。。我也在尝试提取这个，也没有结果呢。可以一起尝试互相交流。。。
...

我用蛋白酶处理了，如果是nisin的话，那它应该会被完全水解失活的啊。。。。我看了一部分nisin相关的文献，他们大多数都可以被硫酸铵沉淀下的。。。。。诶，好忧愁。。。
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9楼2014-10-15 20:43:47
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单体化合物

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
reaper2011(dllchina代发): 金币+2, 鼓励应助 2014-10-16 23:08:45
reaper2011: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-03-19 16:43:36
你用大孔做蛋白，不太清楚可行不，我建议你可以把发酵产物先用不同溶剂萃取一下，萃取成几个部位，比如 水部位，正丁醇部位，乙酸乙酯部位，氯仿部位，石油醚部位，之后在测定活性，如果发现真如你们导师所说蛋白产生的活性的话，那么在这些部位里，水部位活性应该最好，。如果你做过这些部分后发现哪个部分活性好，那你就做哪个部位的，这就算是活性跟踪分离的一种了。

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-10-15 00:37:58
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reaper2011

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 单体化合物 at 2014-10-15 00:37:58
你用大孔做蛋白，不太清楚可行不，我建议你可以把发酵产物先用不同溶剂萃取一下，萃取成几个部位，比如 水部位，正丁醇部位，乙酸乙酯部位，氯仿部位，石油醚部位，之后在测定活性，如果发现真如你们导师所说蛋白产 ...

恩，谢谢您了。我之前做了从发酵液中的有机溶剂的萃取。做了乙酸乙酯的，氯仿甲醇的，没有做石油醚和正丁醇的，发现活性都是在水部位的，有机相是没有抑菌活性的。然后我老师判断这个物质的极性比较大，我想请问一下大侠，这样判断的准确吗？还有就是您的建议“如果发现真如你们导师所说蛋白产生的活性的话，那么在这些部位里，水部位活性应该最好”这就是说如果是蛋白，我用有机溶剂萃取是萃取不出来的，是嘛？但是我硫酸铵沉淀也没有沉淀出来，诶。。。。。非常感谢您了。
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3楼2014-10-15 07:42:24
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0ceaney

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
reaper2011: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-03-19 16:43:50
我觉得抑菌物质就是Nisin吧，那是个多肽，可稳定了，特别小，貌似就20多个氨基酸。。你可以去查一查Nisin相关文献。。。我也在尝试提取这个，也没有结果呢。可以一起尝试互相交流。。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2014-10-15 08:46:10
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