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乳酸乳球菌代谢产物的分离纯化求助 已有3人参与
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各位大侠，实验室自己分离了一株乳酸乳球菌，能产生抗菌物质，排除了乳酸和过氧化氢抑菌的可能，根据文献说，这类菌会产生种细菌素或类细菌素的抗菌物质，可能是蛋白结构，所以做了蛋白酶的酶解实验，发现只能是减少40%的抑菌性。调节PH，做PH梯度实验，发现从2到10，在ph=3.5的时候抑菌最大，在7以后就几乎没有抑菌率了。但是，老板比较执着。。。。。就推测是蛋白性质的物质，让我分离。我使用了硫酸铵沉淀，从20%到90%，发现没有沉淀下来。 做了乙酸乙酯，氯仿甲醇的有机溶剂萃取，没有萃取出来。 为了减少培养基的杂蛋白的干扰，减少分离的难度，我使用了优化后的培养基，用无机氮源代替了有机氮源，后来我做了乙醇的沉淀实验，因为无机氮源用的是硫酸铵，加的乙醇的终浓度是80%，有一种乙醇硫酸铵双水相萃取的感觉，白花花的全是沉淀，但是没有抑菌性，而上清液的抑菌性比原来没有用乙醇沉淀的要高。然后听一大神的建议使用D101大孔树脂进行分离，现在想求助一下各位大神们： 一 在大孔树脂的分离过程中，含有目标物质的溶液的PH，会不会影响大孔树脂的吸附？因为我看文献上有的调节了，有的没有调节，有师兄说如果调节pH可能会才纯化的过程中人为的产生新的物质干扰后续的分离。 二 我使用大孔树脂进行吸附的时候，目前的情况，我因为树脂的类型没有确定，只是在做静态吸附试验，而且我的目的就是分离出来就可以了，我在做静态吸附试验的时候，树脂的单位最大承载量（就是那种过载不过载）我要不要测啊？因为我发现我树脂加的少了，在PH=7的时候是可以吸附上去的，但是加多了就不行了。 三 就是还能不能给点分离的经验或者关于还有别的什么其他的材料可以分离这东西的啊，本人以前学食品的，这东西是门外汉，谢谢各位啦。 |
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4楼2014-10-15 08:46:10
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
reaper2011(dllchina代发): 金币+2, 鼓励应助 2014-10-16 23:08:45
reaper2011: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-03-19 16:43:36
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你用大孔做蛋白，不太清楚可行不，我建议你可以把发酵产物先用不同溶剂萃取一下，萃取成几个部位，比如 水部位，正丁醇部位，乙酸乙酯部位，氯仿部位，石油醚部位，之后在测定活性，如果发现真如你们导师所说蛋白产生的活性的话，那么在这些部位里，水部位活性应该最好，。如果你做过这些部分后发现哪个部分活性好，那你就做哪个部位的，这就算是活性跟踪分离的一种了。 [ 发自小木虫客户端 ] |
2楼2014-10-15 00:37:58
3楼2014-10-15 07:42:24
5楼2014-10-15 09:03:07
50