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铁虫 (小有名气)

[求助] 关于血样处理的一些问题

综合文献,血样预处理如下:
250μL冻融血浆 使用前加入25μL 6M高氯酸和125μL乙腈。混合物在聚丙烯管中使用旋涡混合器充分混合2min,然后5℃下静置30min,然后5℃条件下20000×g离心5min。将上清液和100μL 0.75M的碳酸钾适当混合30S.5℃ 下20000×g离心5min除去离心管中不溶的高氯酸钾。
问题:1、血样在处理液中所占比例比较高,怕提取的不完全,该怎么改进
         2、样品最后需要再过滤之后上HPLC么,生物样品毕竟不干净,分析柱也不便宜
         3、内标物在什么时候加,加多少合适呢(应该是直接先加在血浆里吧)
         4、这里面所有物质的体积加入量有没有什么遵循的原则
开始实验前想先纸上谈兵,希望各位大神不要见笑,帮帮小弟!
不甚感谢
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世界那么乱、装纯给谁看、、、
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