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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 镍柱纯化实验求助
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章恺悦

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1楼 2014-09-30 15:20:51
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璧月

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
章恺悦: 金币+1, ★有帮助 2014-09-30 16:25:36
如果是pET系统，可以找pET操作指南，里面讲得比较详细。
不一样的调控方式，不一样的IPTG浓度
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2楼2014-09-30 15:47:59
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大柏树

禁言 (小有名气)
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3楼2014-09-30 15:58:57
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章恺悦

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4楼2014-09-30 16:34:30
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章恺悦

禁言 (初入文坛)
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5楼2014-09-30 16:36:58
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璧月

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 章恺悦 at 2014-09-30 16:34:30
谢谢！我现在用的这个，有不少杂蛋白，不知你是否有好用的镍柱推荐...

量少的话qiagen的试剂盒效果不错的，只是不知道里面的洗涤液咪唑浓度。
现在我们量大，用的ge的akta，ge的预装柱。

[ 发自小木虫客户端 ]
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6楼2014-09-30 18:39:40
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wchuangqi

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
IPTG 0.5mM. 首先尝试37°C 2个小时。不行的话，直接18°C诱导过夜。镍柱纯化很多时候不是很纯，可以尝试串联纯化。
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天道酬勤
7楼2014-10-02 14:59:19
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大柏树

禁言 (小有名气)
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8楼2014-10-14 17:37:49
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hyuqing

捐助贵宾 (小有名气)

Enriching beads

【答案】应助回帖

大肠杆菌属肠杆菌科，对营养需求不高，多为兼性厌氧菌，在普通培养基上能生长良好，菌落光滑，在液体培养基生长后呈均匀浑浊生长。而LB培养基培养的菌种一般是经过改造的无法在外界环境单独存活和扩增的工程菌，使菌种成倍扩增,达到使用要求。新鲜菌株接种后在OD600=0.3左右加入IPTG到终浓度为1mM,37°，180-200rpm三小时后收集即可
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9楼2014-10-19 18:04:44
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