应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 尿素变性核酸PAGE问题
71/1返回列表
查看: 4330  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

death-x

新虫 (小有名气)

[求助] 尿素变性核酸PAGE问题 已有1人参与

尿素变性核酸PAGE问题

结果如图
1、2是20bp marker，3、4是24nt的oligonucleotide，区别在于偶数编号的样品在上样前经过94度变性冰浴处理。

条件：
胶：10%丙烯酰胺，尿素浓度7M。
loading：含5mM EDTA，去离子甲酰胺配制。
电泳：200V，45min。

问题：
1. 出来的条带比较模糊，实验的哪些地方可能会是主要原因呢？
2. 4号样经过变性处理为什么比3号样直接上样还模糊呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-18 21:53:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shglovelife

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这是RNA吗？变性后为什么要冰浴处理？
赞一下 回复此楼
2楼2014-09-19 14:17:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

death-x

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shglovelife at 2014-09-19 14:17:35
这是RNA吗？变性后为什么要冰浴处理？

DNA，不是一般跑单链的时候都会94-冰浴来打开二级结构吗？
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-19 14:34:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shglovelife

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by death-x at 2014-09-19 14:34:55
DNA，不是一般跑单链的时候都会94-冰浴来打开二级结构吗？...

我们做RNA的，也是单链，跑变性胶之前是95℃变性处理直接上样，不需要冰浴。对了用什么染的？
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-09-20 17:38:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

death-x

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shglovelife at 2014-09-20 17:38:17
我们做RNA的，也是单链，跑变性胶之前是95℃变性处理直接上样，不需要冰浴。对了用什么染的？...

泡EB，染色效果还行。
95度取出来就直接上样？
赞一下 回复此楼
5楼2014-09-21 13:35:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘静远_

新虫 (初入文坛)
请问你从哪里买到的20bp的marker，我的样品是20nt的ssDNA，想用小于100左右的marker检测，可是看了很多家都没有买到
赞一下 回复此楼
6楼2015-03-30 15:08:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxzk

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 刘静远_ at 2015-03-30 15:08:23
请问你从哪里买到的20bp的marker，我的样品是20nt的ssDNA，想用小于100左右的marker检测，可是看了很多家都没有买到

Life(Thermal)有10bp的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
7楼2015-03-31 09:09:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 death-x 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭