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death-x

新虫 (小有名气)

[求助] 尿素变性核酸PAGE问题 已有1人参与

尿素变性核酸PAGE问题

结果如图
1、2是20bp marker,3、4是24nt的oligonucleotide,区别在于偶数编号的样品在上样前经过94度变性冰浴处理。

条件:
胶:10%丙烯酰胺,尿素浓度7M。
loading:含5mM EDTA,去离子甲酰胺配制。
电泳:200V,45min。

问题:
1. 出来的条带比较模糊,实验的哪些地方可能会是主要原因呢?
2. 4号样经过变性处理为什么比3号样直接上样还模糊呢?
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shglovelife

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这是RNA吗?变性后为什么要冰浴处理?
2楼2014-09-19 14:17:35
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death-x

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shglovelife at 2014-09-19 14:17:35
这是RNA吗?变性后为什么要冰浴处理?

DNA,不是一般跑单链的时候都会94-冰浴来打开二级结构吗?
3楼2014-09-19 14:34:55
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shglovelife

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by death-x at 2014-09-19 14:34:55
DNA,不是一般跑单链的时候都会94-冰浴来打开二级结构吗?...

我们做RNA的,也是单链,跑变性胶之前是95℃变性处理直接上样,不需要冰浴。对了用什么染的?
4楼2014-09-20 17:38:17
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death-x

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by shglovelife at 2014-09-20 17:38:17
我们做RNA的,也是单链,跑变性胶之前是95℃变性处理直接上样,不需要冰浴。对了用什么染的?...

泡EB,染色效果还行。
95度取出来就直接上样?
5楼2014-09-21 13:35:04
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刘静远_

新虫 (初入文坛)

请问你从哪里买到的20bp的marker,我的样品是20nt的ssDNA,想用小于100左右的marker检测,可是看了很多家都没有买到
6楼2015-03-30 15:08:23
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lxzk

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 刘静远_ at 2015-03-30 15:08:23
请问你从哪里买到的20bp的marker,我的样品是20nt的ssDNA,想用小于100左右的marker检测,可是看了很多家都没有买到

Life(Thermal)有10bp的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
7楼2015-03-31 09:09:41
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