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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 尿素变性核酸PAGE问题
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death-x

新虫 (小有名气)

[求助] 尿素变性核酸PAGE问题 已有1人参与

尿素变性核酸PAGE问题

结果如图
1、2是20bp marker，3、4是24nt的oligonucleotide，区别在于偶数编号的样品在上样前经过94度变性冰浴处理。

条件：
胶：10%丙烯酰胺，尿素浓度7M。
loading：含5mM EDTA，去离子甲酰胺配制。
电泳：200V，45min。

问题：
1. 出来的条带比较模糊，实验的哪些地方可能会是主要原因呢？
2. 4号样经过变性处理为什么比3号样直接上样还模糊呢？
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1楼 2014-09-18 21:53:41
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shglovelife

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by death-x at 2014-09-19 14:34:55
DNA，不是一般跑单链的时候都会94-冰浴来打开二级结构吗？...

我们做RNA的，也是单链，跑变性胶之前是95℃变性处理直接上样，不需要冰浴。对了用什么染的？
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4楼2014-09-20 17:38:17
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shglovelife

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这是RNA吗？变性后为什么要冰浴处理？
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2楼2014-09-19 14:17:35
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death-x

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shglovelife at 2014-09-19 14:17:35
这是RNA吗？变性后为什么要冰浴处理？

DNA，不是一般跑单链的时候都会94-冰浴来打开二级结构吗？
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3楼2014-09-19 14:34:55
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death-x

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shglovelife at 2014-09-20 17:38:17
我们做RNA的，也是单链，跑变性胶之前是95℃变性处理直接上样，不需要冰浴。对了用什么染的？...

泡EB，染色效果还行。
95度取出来就直接上样？
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5楼2014-09-21 13:35:04
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