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zhangyunjing

金虫 (小有名气)

[求助] 尿素变性PAGE点样漂样的问题已有2人参与

大家好,
谁做过尿素变性PAGE胶的相关实验,请教大家一个问题,8 M 的尿素变性PAGE胶的配方如下所示:
           试剂                                     40 mL 10% Urea-PAGE胶
30 %凝胶贮存液(Acr:Bis=29:1)              13.3 mL           
尿素                                                              19.2 g
5×TBE buffer                                               4 mL
ddH2O                                                     To 40 ml
10 %过硫酸铵                                              200 ul
TEMED                                                        20 ul
样品为TE溶解的ssDNA,
loading为2 x RNA Loading Dye(95% Formamide, 0.5 mmol/L EDTA, 0.025% Bromophenol Blue, 0.025% xylene cyanol FF, 0.025% SDS),
ssDNA溶液与2 x RNA Loading Dye等体积混合
但是上样时将样品加入胶孔的底部,过一会儿就漂上来了,请问是什么原因,怎么解决呢?
谢谢!
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rainwater
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
Running buffer是什么?是否忘了稀释、用浓缩液了?
2楼2014-08-06 12:03:57
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-06 12:03:57
Running buffer是什么?是否忘了稀释、用浓缩液了?

running buffer为0.5XTBE buffer
rainwater
3楼2014-08-06 12:48:28
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)

另外,今天重新配制了不含尿素的PAGE胶,只是不加尿素,其他的东西都跟上面一样,结果点样时就不漂样了,感觉像是尿素引起的漂样,但不知到是什么原因
rainwater
4楼2014-08-06 12:50:18
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-08-06 15:53:44
我以前做过聚丙烯酰胺凝胶电泳,点样前,样品要加Loading Buffer,具体操作不记得了,你可以查一下这方面的论文,是有关AFLP的,都要跑这个胶,和你说的PAGE胶应该一样吧
5楼2014-08-06 15:35:32
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602059625

金虫 (知名作家)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-08-06 23:05:55
孔里有尿素
要用枪吸着缓冲液往孔里吹打
然后预电泳
点样之前再吹打

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[url=http://ip.WoTuLa.com][img]http://i.WoTuLa.com/note.png?name=填写姓名&say=这里填写您想说的内容。[/img][/url]
6楼2014-08-06 20:25:37
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 602059625 at 2014-08-06 20:25:37
孔里有尿素
要用枪吸着缓冲液往孔里吹打
然后预电泳
点样之前再吹打

确实是这样的,昨天按照MBI的方案做了一次,将胶孔用1XTBE缓冲液洗涤三次,在点样就不漂了,多谢!
rainwater
7楼2014-08-07 08:55:05
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