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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 尿素变性PAGE点样漂样的问题
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)

[求助] 尿素变性PAGE点样漂样的问题 已有2人参与

大家好，
谁做过尿素变性PAGE胶的相关实验，请教大家一个问题，8 M 的尿素变性PAGE胶的配方如下所示：
           试剂                                     40 mL 10% Urea-PAGE胶
30 %凝胶贮存液(Acr:Bis=29:1)              13.3 mL           
尿素                                                              19.2 g
5×TBE buffer                                               4 mL
ddH2O                                                     To 40 ml
10 %过硫酸铵                                              200 ul
TEMED                                                        20 ul
样品为TE溶解的ssDNA，
loading为2 x RNA Loading Dye（95% Formamide, 0.5 mmol/L EDTA, 0.025% Bromophenol Blue, 0.025% xylene cyanol FF, 0.025% SDS），
ssDNA溶液与2 x RNA Loading Dye等体积混合
但是上样时将样品加入胶孔的底部，过一会儿就漂上来了，请问是什么原因，怎么解决呢？
谢谢！
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rainwater
1楼 2014-08-06 11:29:15
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Running buffer是什么？是否忘了稀释、用浓缩液了？
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2楼2014-08-06 12:03:57
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-06 12:03:57
Running buffer是什么？是否忘了稀释、用浓缩液了？

running buffer为0.5XTBE buffer
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rainwater
3楼2014-08-06 12:48:28
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)
另外，今天重新配制了不含尿素的PAGE胶，只是不加尿素，其他的东西都跟上面一样，结果点样时就不漂样了，感觉像是尿素引起的漂样，但不知到是什么原因
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rainwater
4楼2014-08-06 12:50:18
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-06 15:53:44
我以前做过聚丙烯酰胺凝胶电泳，点样前，样品要加Loading Buffer，具体操作不记得了，你可以查一下这方面的论文，是有关AFLP的，都要跑这个胶，和你说的PAGE胶应该一样吧
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5楼2014-08-06 15:35:32
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602059625

金虫 (知名作家)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-06 23:05:55
孔里有尿素
要用枪吸着缓冲液往孔里吹打
然后预电泳
点样之前再吹打
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

zhangyunjing
[url=http://ip.WoTuLa.com][img]http://i.WoTuLa.com/note.png?name=填写姓名&say=这里填写您想说的内容。[/img][/url]
6楼2014-08-06 20:25:37
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 602059625 at 2014-08-06 20:25:37
孔里有尿素
要用枪吸着缓冲液往孔里吹打
然后预电泳
点样之前再吹打

确实是这样的，昨天按照MBI的方案做了一次，将胶孔用1XTBE缓冲液洗涤三次，在点样就不漂了，多谢！
赞一下(2人) 回复此楼
rainwater
7楼2014-08-07 08:55:05
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