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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 急，细胞表达情况不一致。求大神们解答一下。
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jorrell

铁虫 (初入文坛)

[求助] 急，细胞表达情况不一致。求大神们解答一下。已有1人参与

大家好，请教大家一个问题，我有一个带FLAG的表达载体，同时转染到293T和Hela细胞中，36H后收集蛋白跑western，是跑在同一张膜上的，但是照膜后发现在293T中有条带，但是在Hela细胞中却什么也没有，这个是为啥？hela细胞转了EGFP做阳性对照，是可以看到有荧光的。
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1楼2014-09-10 19:32:24
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卓尔不凡2012

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不同细胞的真核表达水平是不一样的，293T较易表达，Hela细胞则一般，若EGFP作对照有荧光，则说明你操作没问题，应该是细胞差异的原因。
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3楼2014-09-11 21:47:25
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jorrell

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 卓尔不凡2012 at 2014-09-11 21:47:25
不同细胞的真核表达水平是不一样的，293T较易表达，Hela细胞则一般，若EGFP作对照有荧光，则说明你操作没问题，应该是细胞差异的原因。

那是不是就说在hela细胞中这个载体不工作，不能用了？我的实验是需要在hela细胞中表达的。
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4楼2014-09-12 09:24:46
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wener0405

新虫 (初入文坛)
不知道你表达载体转了多少量？可以试着提高转入质粒的量，再看跑电泳看是否表达。而且建议可以把收蛋白的时间延长到48小时。
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5楼2014-09-17 21:41:41
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jorrell

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wener0405 at 2014-09-17 21:41:41
不知道你表达载体转了多少量？可以试着提高转入质粒的量，再看跑电泳看是否表达。而且建议可以把收蛋白的时间延长到48小时。

我用的是fermentas TurboFect转染试剂，按照说明书加了4ug的载体，后来我又做了一次，48H后收蛋白，但是还是没有看到有蛋白表达。
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6楼2014-09-19 23:01:58
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