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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 最新实验室的细胞之间出现了好多小点污染，求有经验的大神给参谋下（有图）
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yangyxt

新虫 (初入文坛)

[求助] 最新实验室的细胞之间出现了好多小点污染，求有经验的大神给参谋下（有图）

实验室最近养细胞周围都出现了好多小点，由于焦距的问题有的是小黑点有的是透明小点。结肠癌细胞受到这些小点的影响生长缓慢，活力出现问题。而乳腺癌细胞（MDA-MB-231细胞）也出现了大量的影响不过基本没有受到太多的影响，感觉活力正常而且增殖速度也正常。
这些小点在长时间不换液的情况下量明显比勤换液的时候多，平时与细胞一起贴在壁上生长。以下给出几幅图片，（均是MDA-MB-231细胞）细胞在6孔板内生长了72h之后所拍摄的，40倍镜下，无药，10%胎牛血清（四季青）。
1. 
2.
3.
以上三幅黑白的是荧光倒置显微镜明场拍摄的，图中圈出的为一些透明小点，“框”出的为一些连成片的体积更小的不明物...
以下还有一副彩色的是荧光正置显微镜下明场拍摄的，40倍镜，且细胞经消化后，类似上面三图的小点也漂浮起来。（圈出来了）并且很神奇的都在视野内向上方移动...（明显属于游动状态）
4.
不知是什么污染，求大神解答...因为要做细胞分泌蛋白的检测，所以对这些污染物需要严格控制和检查。另外如果可以的话希望有经验的童鞋和老师可以提供一些预防及治疗的方法。是否有可能是支原体，这个倍数下看得到吗？还是黑胶虫？
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1楼 2013-05-01 14:35:03
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

超然渡陈

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

以前也遇到过这样的情况，求证了很多人，都说是黑胶虫，但是又有文献报道现在还没有证实这个东东的存在。这些小黑点不是培养基带来的，也不是操作污染，是在培养过程中产生的，跟培养箱有很大关系。细胞状态好的话这些小黑点就会逐渐减少，细胞状态差的话小黑点会越来越多，而且抗生素什么的对它都没任何影响。培养箱中有一瓶细胞污染的话很可能也会导致其它瓶细胞的污染。我们当时的情况是在那个培养箱中培养的细胞均出现小黑点，然后把所有细胞移出去后用75%酒精把培养箱内部彻底洗了几遍，接着用紫外灯照过夜之后再培养细胞就没再出现小黑点。
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15楼2013-08-08 13:05:28
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yangyxt

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by panyuzhu at 2013-05-04 15:38:26
看图片，和楼主分析，应该是神一样存在的 黑胶虫，楼主中奖了

http://v.youku.com/v_show/id_XNTAzODQyOTY=.html好像和这个视频中不大一样吧...
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4楼2013-05-04 15:47:21
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yangyxt

新虫 (初入文坛)
myprayer: 屏蔽内容 2013-05-04 20:06:28
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2楼2013-05-04 13:05:59
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)
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3楼2013-05-04 15:38:26
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
5楼2013-05-04 16:19:58
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-05-04 20:06:11
本帖内容被屏蔽
6楼2013-05-04 16:22:32
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yangyxt

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by panyuzhu at 2013-05-04 16:19:58
是不是支原体污染...

我不懂，想请教一下支原体在40倍镜下看得到吗？
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7楼2013-05-04 18:27:09
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senix

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

换一批新的细胞，有很多原因引起这种小黑点，例如传说中的黑胶虫，也有可能是细胞状态不好，细胞碎片。建议重新换细胞和培养基！
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做实验就是和上帝玩游戏！
8楼2013-05-04 19:48:37
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yangyxt

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by senix at 2013-05-04 19:48:37
换一批新的细胞，有很多原因引起这种小黑点，例如传说中的黑胶虫，也有可能是细胞状态不好，细胞碎片。建议重新换细胞和培养基！

可是培养基大家都是L-15啊....都买的干粉的自己配的...吧...
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9楼2013-05-04 23:01:27
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senix

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by yangyxt at 2013-05-04 23:01:27
可是培养基大家都是L-15啊....都买的干粉的自己配的...吧......

最好买配好的，自己配还是很容易污染的！
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做实验就是和上帝玩游戏！
10楼2013-05-05 19:54:34
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