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jorrell

铁虫 (初入文坛)

[求助] 急,细胞表达情况不一致。求大神们解答一下。 已有1人参与

大家好,请教大家一个问题,我有一个带FLAG的表达载体,同时转染到293T和Hela细胞中,36H后收集蛋白跑western,是跑在同一张膜上的,但是照膜后发现在293T中有条带,但是在Hela细胞中却什么也没有,这个是为啥?hela细胞转了EGFP做阳性对照,是可以看到有荧光的。
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jorrell

铁虫 (初入文坛)

顶顶、
2楼2014-09-11 09:18:55
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卓尔不凡2012

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不同细胞的真核表达水平是不一样的,293T较易表达,Hela细胞则一般,若EGFP作对照有荧光,则说明你操作没问题,应该是细胞差异的原因。
3楼2014-09-11 21:47:25
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jorrell

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 卓尔不凡2012 at 2014-09-11 21:47:25
不同细胞的真核表达水平是不一样的,293T较易表达,Hela细胞则一般,若EGFP作对照有荧光,则说明你操作没问题,应该是细胞差异的原因。

那是不是就说在hela细胞中这个载体不工作,不能用了?我的实验是需要在hela细胞中表达的。
4楼2014-09-12 09:24:46
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wener0405

新虫 (初入文坛)

不知道你表达载体转了多少量?可以试着提高转入质粒的量,再看跑电泳看是否表达。而且建议可以把收蛋白的时间延长到48小时。
5楼2014-09-17 21:41:41
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jorrell

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wener0405 at 2014-09-17 21:41:41
不知道你表达载体转了多少量?可以试着提高转入质粒的量,再看跑电泳看是否表达。而且建议可以把收蛋白的时间延长到48小时。

我用的是fermentas TurboFect转染试剂,按照说明书加了4ug的载体,后来我又做了一次,48H后收蛋白,但是还是没有看到有蛋白表达。
6楼2014-09-19 23:01:58
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