应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 急，细胞表达情况不一致。求大神们解答一下。
61/1返回列表
查看: 1060  |  回复: 5
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jorrell

铁虫 (初入文坛)

[求助] 急，细胞表达情况不一致。求大神们解答一下。已有1人参与

大家好，请教大家一个问题，我有一个带FLAG的表达载体，同时转染到293T和Hela细胞中，36H后收集蛋白跑western，是跑在同一张膜上的，但是照膜后发现在293T中有条带，但是在Hela细胞中却什么也没有，这个是为啥？hela细胞转了EGFP做阳性对照，是可以看到有荧光的。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2014-09-10 19:32:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jorrell

铁虫 (初入文坛)
顶顶、
回复此楼
2楼2014-09-11 09:18:55
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卓尔不凡2012

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不同细胞的真核表达水平是不一样的，293T较易表达，Hela细胞则一般，若EGFP作对照有荧光，则说明你操作没问题，应该是细胞差异的原因。
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-11 21:47:25
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jorrell

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 卓尔不凡2012 at 2014-09-11 21:47:25
不同细胞的真核表达水平是不一样的，293T较易表达，Hela细胞则一般，若EGFP作对照有荧光，则说明你操作没问题，应该是细胞差异的原因。

那是不是就说在hela细胞中这个载体不工作，不能用了？我的实验是需要在hela细胞中表达的。
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-12 09:24:46
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wener0405

新虫 (初入文坛)
不知道你表达载体转了多少量？可以试着提高转入质粒的量，再看跑电泳看是否表达。而且建议可以把收蛋白的时间延长到48小时。
赞一下 回复此楼
5楼2014-09-17 21:41:41
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jorrell

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wener0405 at 2014-09-17 21:41:41
不知道你表达载体转了多少量？可以试着提高转入质粒的量，再看跑电泳看是否表达。而且建议可以把收蛋白的时间延长到48小时。

我用的是fermentas TurboFect转染试剂，按照说明书加了4ug的载体，后来我又做了一次，48H后收蛋白，但是还是没有看到有蛋白表达。
赞一下 回复此楼
6楼2014-09-19 23:01:58
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jorrell 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭