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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 碱裂解法提取的质粒纯度不高怎么办呢
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心素如简1991

新虫 (初入文坛)

[求助] 碱裂解法提取的质粒纯度不高怎么办呢 已有6人参与

碱裂解法提取的质粒纯度不高怎么办呢？A260/A280为1.18，A260/230为0.0829
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1楼 2014-09-05 14:29:35
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zero19871029

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这要看你怎么纯化了，是用试剂盒提取的还是手工提取的，大提的方法还是很多的呢~
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2楼2014-09-05 17:32:10
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zeroon

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
心素如简1991(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-10 08:47:23
严重蛋白质污染了。楼主一定是苯酚/氯仿抽提时没抽提干净。注意抽提步骤的操作。
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3楼2014-09-06 21:21:05
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匿名

用户注销 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
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4楼2014-09-07 21:00:58
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miaoshuang

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
心素如简1991(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-10 08:47:38
技术上是不是还有点欠缺？多练练吧，另外你查看一下，你用的试剂是否都正常的，不要用放置太久的试剂或加错试剂
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努力，勇敢向前走，一切皆有可能
5楼2014-09-08 11:27:55
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Merrylegs

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by louis_cheung at 2014-09-07 21:00:58
一直用qiagen的质粒大题试剂盒，用了近100次，效果很不错的，质粒260/280都是1.8几，可以尝试一下~

用了很多品牌的，还是QIAGEN的试剂盒最稳定，效果最好。
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6楼2014-09-08 15:59:02
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焃__麟

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

看看你的质粒是不是low copy的，还有就是你的操作了，方法都差不多
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行到水穷处，坐看云起时
7楼2014-09-09 19:27:26
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wopopwz123

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
心素如简1991(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-09-10 08:47:51
这个结果是你没有去除蛋白，你考虑一下问题：第一，你摇菌液的时间，不要太长，过长时间会产生很多蛋白，一般摇8h左右就没有问题了。第二，你要是手提取质粒，你在溶液三中加入5%-10%的盐酸胍，离心时候你13000 15min 基本上就能去除蛋白了。第三，你沉淀质粒DNA的时候，你用异丙醇进行沉淀。这样效果好。如果还有问题，你可以联系我。
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8楼2014-09-09 23:24:00
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