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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 求助各位大侠碱裂解法提取质粒时，什么时候加入RNase酶？
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心素如简1991

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助各位大侠碱裂解法提取质粒时，什么时候加入RNase酶？ 已有3人参与

碱裂解法提取质粒时，什么时候加入RNase酶？在在加溶液1时，和溶菌酶一起加入，37℃水浴1h，能除尽RNA吗？还有为什么加完溶液3，离心没有明显的分层啊？
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1楼 2014-08-28 20:10:38
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-08-28 21:48:18
加完溶液3后，有白色沉淀析出，离心应该是沉淀，不是什么分层
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-08-28 21:24:00
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叫我盖小盖

新虫 (初入文坛)
除不尽，后面再除一次效果比较好。

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3楼2014-08-28 22:58:25
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yuxiangdan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
心素如简1991: 金币+1, ★有帮助 2014-09-01 08:36:01
不用加溶菌酶呀，我一般是在溶液3离心完的上清里加RNase酶孵育

[ 发自小木虫客户端 ]
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成功者永不放弃，放弃者永不成功。
4楼2014-08-28 23:33:34
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心素如简1991

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yuxiangdan at 2014-08-28 23:33:34
不用加溶菌酶呀，我一般是在溶液3离心完的上清里加RNase酶孵育

那你这样加，RNase的工作浓度是多少？你配的储存浓度是多少啊？
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5楼2014-09-01 08:37:20
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
心素如简1991(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-01 19:33:07
在P1中加RNase，后继步骤照常进行，细菌本身就含有丰富的RNase。
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6楼2014-09-01 09:06:40
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
你都用碱裂解了，还要煮沸？
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7楼2014-09-01 09:30:37
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
★ ★
心素如简1991(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-01 19:33:29
哦哦。
我是这样做的。
溶液123按顺序加，最后溶解的时候加TER，里面就包含了RNA酶。
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8楼2014-09-01 09:32:08
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