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心素如简1991

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助各位大侠碱裂解法提取质粒时,什么时候加入RNase酶? 已有3人参与

碱裂解法提取质粒时,什么时候加入RNase酶?在在加溶液1时,和溶菌酶一起加入,37℃水浴1h,能除尽RNA吗?还有为什么加完溶液3,离心没有明显的分层啊?
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-08-28 21:48:18
加完溶液3后,有白色沉淀析出,离心应该是沉淀,不是什么分层
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-08-28 21:24:00
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叫我盖小盖

新虫 (初入文坛)

除不尽,后面再除一次效果比较好。

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-08-28 22:58:25
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yuxiangdan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
心素如简1991: 金币+1, 有帮助 2014-09-01 08:36:01
不用加溶菌酶呀,我一般是在溶液3离心完的上清里加RNase酶孵育

[ 发自小木虫客户端 ]
成功者永不放弃,放弃者永不成功。
4楼2014-08-28 23:33:34
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心素如简1991

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yuxiangdan at 2014-08-28 23:33:34
不用加溶菌酶呀,我一般是在溶液3离心完的上清里加RNase酶孵育

那你这样加,RNase的工作浓度是多少?你配的储存浓度是多少啊?
5楼2014-09-01 08:37:20
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖


心素如简1991(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-01 19:33:07
在P1中加RNase,后继步骤照常进行,细菌本身就含有丰富的RNase。
6楼2014-09-01 09:06:40
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

你都用碱裂解了,还要煮沸?
7楼2014-09-01 09:30:37
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

★ ★
心素如简1991(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-01 19:33:29
哦哦。
我是这样做的。
溶液123按顺序加,最后溶解的时候加TER,里面就包含了RNA酶。
8楼2014-09-01 09:32:08
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