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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » CO-ip试剂盒细节问题
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大鱼大鱼

新虫 (初入文坛)

[求助] CO-ip试剂盒细节问题 已有2人参与

1、co-ip的试剂盒洗脱用的是tris  pH9.5以及EB  问是洗脱前将9.5和EB混合再洗脱柱子呢还是先用EB洗脱完成后再加9.5呢？
2、抗体用什么稀释好呢?TBS-T还是封闭液？？
求助啊！谢谢！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2014-08-20 08:26:02
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-08-20 19:06:15
大鱼大鱼: 金币+1, ★有帮助 2014-08-22 23:32:12
文库中的Co-IP试剂盒中文说明
http://wenku.baidu.com/view/997cf21014791711cc791771.html
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
2楼2014-08-20 13:49:40
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大鱼大鱼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-08-20 13:49:40
文库中的Co-IP试剂盒中文说明
http://wenku.baidu.com/view/997cf21014791711cc791771.html

感谢链接，这个说明很早就看过了。洗脱buffer加入pH 9.5的1M Tris来快速中和洗脱液。就是不明白是先洗脱下来再加Tris 9.5还是在洗脱前先中和洗脱液。
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3楼2014-08-20 21:58:50
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zero19871029

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
大鱼大鱼: 金币+4, ★★★★★最佳答案 2014-08-22 23:32:01
洗脱下来后再中和，先中和了就洗不下来了~
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4楼2014-08-21 08:51:28
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大鱼大鱼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zero19871029 at 2014-08-21 08:51:28
洗脱下来后再中和，先中和了就洗不下来了~

亲，为什么呢？洗脱前中和PH和洗脱后再中和有什么区别呢？这是什么原因导致要中和PH的呢？
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5楼2014-08-21 16:23:18
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zero19871029

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 大鱼大鱼 at 2014-08-21 16:23:18
亲，为什么呢？洗脱前中和PH和洗脱后再中和有什么区别呢？这是什么原因导致要中和PH的呢？...

这个是洗脱的原理，用酸将蛋白从agarose上洗脱下来，再用碱来中和
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6楼2014-08-21 17:14:53
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大鱼大鱼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zero19871029 at 2014-08-21 17:14:53
这个是洗脱的原理，用酸将蛋白从agarose上洗脱下来，再用碱来中和...

再请教一下，一共离心三次，是每一次先用EB洗脱下来马上就加9.5，还是先三次洗脱下来完成后再加9.5呢？
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7楼2014-08-21 21:11:34
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zero19871029

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 大鱼大鱼 at 2014-08-21 21:11:34
再请教一下，一共离心三次，是每一次先用EB洗脱下来马上就加9.5，还是先三次洗脱下来完成后再加9.5呢？...

如果对蛋白的活性要求高的话还是每次都加吧，毕竟酸性环境对蛋白活性的伤害还是蛮大的
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8楼2014-08-25 17:35:32
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