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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » BCA试剂盒显色问题
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叫我陈爷

新虫 (初入文坛)

[求助] BCA试剂盒显色问题已有1人参与

一直在用BCA试剂盒，最近藻细胞前处理之后用蛋白试剂盒发现一个问题：37度孵育半小时之后不显色，要等到一个半小时才显色，有人知道为什么吗？
我怀疑：
1.以前破碎功率是300，最近破碎换成400W之后，破坏了蛋白的结构。但是如果结构破坏了，应该是不显色，为什么一个半小时之后又显色了呢。
2试剂盒有问题，但是标准品，半个小时之后是有颜色的。
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1楼2014-05-23 11:21:40
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楼兰云梦

新虫 (初入文坛)
去谷歌上查查吧

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-05-23 11:22:18
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yipan

铜虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议每次测定时都做标准曲线。因为BCA法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。
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3楼2014-05-23 13:34:37
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叫我陈爷

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yipan at 2014-05-23 13:34:37
建议每次测定时都做标准曲线。因为BCA法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。

温度也是37度的，按照试剂盒上面写的
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4楼2014-05-23 14:10:50
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叫我陈爷

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yipan at 2014-05-23 13:34:37
建议每次测定时都做标准曲线。因为BCA法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。

颜色是会越来越深的，这个是因为水分蒸发所致。但是正常来讲30分钟后应该是紫色的，过一段时间会越来越紫，但是我的样品半小时之后和空白的颜色差不多，没有紫色的迹象，过一个半小时才显示紫色，我就觉得很奇怪了。
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5楼2014-05-23 14:17:35
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