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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 高分子生物材料 » [求助]有关高分子膜材料的蛋白吸附检测
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bluesr

木虫 (初入文坛)

[求助] [求助]有关高分子膜材料的蛋白吸附检测

我做的高分子聚合物成膜后想做一下它的表面蛋白吸附。自己用BCA蛋白试剂盒做完，每次按照说明书操作，在洗脱这一项总是觉得没洗干净。就是测出的结果在1—3μg/cm2这个级别，我的材料是是油溶性的，所以我自己做的是用白蛋白。我也没做过，总感觉过高.就想问问大家，这个是不是值太高了？还有能不能有其他的测试方法，最好有没有实验室可以提供蛋白检测的？能不能帮做一下，老板说了出测试费也行的。谢谢。
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1楼 2011-11-29 11:03:42
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lins79

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
bluesr(金币+5): 感谢 2011-11-30 21:39:21
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-12-01 16:45:05
可以试试酶联免疫吸附法
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2楼2011-11-29 21:04:14
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rainbows1

禁虫 (著名写手)
★
bluesr(金币+5): 感谢 2011-12-01 12:27:44
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-12-01 16:45:14
本帖内容被屏蔽
3楼2011-12-01 12:16:31
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bluesr

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by rainbows1 at 2011-12-01 12:16:31:
不算高，取决于吸附用的蛋白浓度。一方面可以用曲拉通洗脱测洗脱液的浓度，一方面也可以测吸附前后溶液中蛋白浓度变化。两者相比较之后就知道是不是洗脱干净了。

蛋白浓度用的是4.5mg/mL,这样测出来1-3μg/cm2,也不算高吗？
测吸附前后溶液中蛋白浓度变化 这个怎么测呢？谢谢啊
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4楼2011-12-01 12:26:56
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rainbows1

禁虫 (著名写手)
★
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-12-01 16:45:24
bluesr(金币+5): 谢谢，还有问题，麻烦再解答一下。 2011-12-02 13:45:26
本帖内容被屏蔽
5楼2011-12-01 15:12:55
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bluesr

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by rainbows1 at 2011-12-01 15:12:55:
我用BSA，0.1mg/ml~1mg/ml。太高了就吸附饱和了，而且测定误差比较大。用低浓度的时候，测吸附前后溶液比较准确。就是吸附前溶液取个样，吸附完了把材料捞出来，溶液再取样测一下，两者相减就是被吸附掉的量。如果 ...

按BCA就是先吸附，然后再用PBS洗掉表面并未吸附的蛋白溶液，然后置于洗脱液中洗脱，测定洗脱下来的蛋白浓度即为吸附浓度。我主要疑惑用PBS洗掉表面并未吸附的蛋白溶液，这一步有没有洗干净？
如果测试吸附前后溶液浓度的话，把材料捞出时表面难道不会带走一些并没有吸附的蛋白溶液吗？这样的话浓度测定会不会不准？还有如果不用BCA显色测其吸光度之类的话，怎么测定蛋白浓度呢？就是用什么值表示蛋白的量。我不懂这个啊，问的有点基础，麻烦了。
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6楼2011-12-02 13:54:36
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rainbows1

禁虫 (著名写手)
★
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-12-02 23:06:29
bluesr(金币+20): 多谢多谢~~ 2011-12-04 21:07:09
本帖内容被屏蔽
7楼2011-12-02 18:28:19
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东啸长安

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by rainbows1 at 2011-12-01 15:12:55
我用BSA，0.1mg/ml~1mg/ml。太高了就吸附饱和了，而且测定误差比较大。用低浓度的时候，测吸附前后溶液比较准确。就是吸附前溶液取个样，吸附完了把材料捞出来，溶液再取样测一下，两者相减就是被吸附掉的量。如果浓 ...

我和这位美女做的差不多，都是用低浓度的BSA溶液，测吸附前后的浓度变化！不过我用的是考马斯亮蓝染色法测量蛋白质吸附量！
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8楼2013-05-23 21:18:50
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